桃紅四物湯對藥物致不完全流產早孕大鼠的血管生成及Ang—1，Ang—2，Tie—2表達的影響
藥理
作者：梁傑 尹登科 李白坤 劉竹青 李珊珊 陳孟夏 王曉宇 彭代銀
[摘要] 目的：觀察桃紅四物湯對藥物致早孕大鼠不完全流產模型的大鼠子宮微血管密度，血清中促血管生成素1（Ang-1）和促血管生成素2（Ang-2）含量及子宮組織中酪氨酸激酶受體（Tie-2）表達的影響。方法：SD早孕大鼠采用灌胃米索前列醇（100 μg·kg-1）和米非司酮（8、3 mg·kg-1）造成不完全流產大鼠模型，隨機分為模型組（等容量蒸餾水）、陽性藥物益母草顆粒組（4、3 g·kg-1）、桃紅四物湯高、中、低劑量組（18、0，9、0，4、5 g·kg-1），受孕大鼠作為正常對照組（等容量蒸餾水）。連續灌胃7 d後腹主動脈取血及大鼠子宮組織，采用酶聯免疫吸附法（ELISA）檢測血清中Ang-1和Ang-2的含量，采用免疫組化檢測子宮組織的Tie-2及微血管密度（MVD）CD34的表達情況。結果：桃紅四物湯顯著增加藥物流產後大鼠子宮的血管微密度，顯著升高血清中Ang-1，Ang-2的含量，並使子宮組織中Tie-2的表達顯著增加。結論：桃紅四物湯有明顯的促進不完全流產早孕大鼠子宮血管新生作用，作用機製可能與調節血清中Ang-1和Ang-2的濃度及子宮組織中Tie-2的表達相關。
[關鍵詞] 桃紅四物湯；MVD；Ang-1；Ang-2；Tie-2
[收稿日期] 2013-05-06
[基金項目] 國家自然科學基金項目（）；安徽省高校自然科學基金項目（KJ2011A89）
[通信作者] *彭代銀，教授，Tel：（0551），E-mail： pengdy@ahtcm、edu、cn
[作者簡介] 梁傑，碩士研究生，，E-mail@qq、com 桃紅四物湯源於清朝著名醫家吳謙所著的《醫宗金鑒》，是由四物湯（白芍、熟地黃、川芎、當歸）加桃仁、紅花組成，是婦科血瘀證尤其產後血瘀諸證治療常用方、祛瘀生新的代表方。四物湯以補血而不滯血，和血而不傷血為特點，為治療血病通用之方，多用於血虛而又血行不暢的疾病。桃紅四物湯在四物湯的基礎上加用桃仁、紅花二味，加重其活血化瘀生新之效。根據我國傳統醫學理論：“瘀血不去，新血不生，祛瘀生新”。產後或者藥物流產後，出血時間延長主要原因是瘀血內停，妊娠物留於子宮內，導致子宮內膜的新生修複延緩，出血延長[1]。而子宮內膜的新生修複與子宮內膜血管的新生密切相關，在眾多的減少產後或藥物流產後子宮出血環節中子宮內膜血管的新生是極為重要的一個環節[2]。近年來對桃紅四物湯的藥理研究較多，但多數為探究其祛瘀的藥理作用及機製，而對其生新作用及機製研究較少。結合本課題組前期證實桃紅四物湯可以改善產後血瘀大鼠的血流狀態[3]，對過氧化氫損傷的人臍靜脈內皮細胞具有保護作用[4]，同時可以調節內皮細胞VEGF的釋放[5]，而VEGF含量的變化與血管內皮細胞的增殖密切相關。本研究考察桃紅四物湯對米非司酮和米索前列醇致早孕流產大鼠子宮內膜的微血管密度的影響，並初步研究其機製，為進一步闡明桃紅四物湯對產後子宮保護的作用機製奠定基礎。
1 材料
1、1 動物健康SD大鼠，雄鼠25隻，體重260～300 g，雌鼠60隻，體重230～260 g，購自安徽省實驗動物中心，許可證號SCXK（皖）2011-002。
1、2 藥物與試劑桃紅四物湯（THSWD，桃仁、紅花、當歸、川芎、熟地黃、白芍，購自合肥樂家老鋪中藥飲片有限公司，所購藥材經本校周建理教授鑒定），各藥材按複方配比[5]，用75%乙醇提取，旋轉蒸發，減壓幹燥至幹粉；陽性對照藥物：益母草顆粒（山東健民藥業有限公司，批號）；米非司酮片（北京紫竹藥業有限公司，批號）；米索前列醇片（北京紫竹藥業有限公司，批號）；水合氯醛（國藥集團化學試劑有限公司，批號）；大鼠Ang-1酶聯檢測試劑盒、大鼠Ang-2酶聯檢測試劑盒（上海綠葉生物技術有限公司，批號）；Tie-2兔抗鼠多克隆抗體，CD34兔抗鼠多克隆抗體（武漢博士德生物工程有限公司）。
1、3 儀器倒置顯微鏡；iMARK型酶標儀（BIO-RAD）；Centrifuge 5417R型離心機（eppendorf）；DNP-9052BS-Ⅲ型電熱恒溫箱（上海新苗醫療器械廠）；ALC210型電子分析天平（北京賽多利斯儀器係統有限公司）；電子天平（上海天平儀器廠）。
2 方法
2、1 模型複製參照文獻方法[6]，將購買的大鼠適應性喂養1周，將大鼠於每日8：00按雌雄比2∶1的比例合籠，次日5：00進行陰道圖片檢測，以在顯微鏡中發現精子為計時妊娠第1天。在妊娠第7天按體重灌胃米非司酮8、3 mg·kg-1（8：00）及米索前列醇100 μg·kg-1 （18：00），灌胃完米非司酮後在陰道內塞入適量大小的棉球1個，次日分別於8：00和20：00取出棉球，觀察到棉球有出血時，即可判斷早孕大鼠藥物流產模型複製成功。
2、2 分組與給藥將早孕大鼠藥物流產模型複製成功的大鼠隨機分為模型組、陽性藥物益母草顆粒組（4、3 g·kg-1）、桃紅四物湯高、中、低劑量組（18、0，9、0，4、5 g·kg-1），每組10隻，另取10隻受孕的大鼠作為正常對照組。各組分別於模型複製成功後的第2天灌胃，參照本課題組的前期實驗研究給予的劑量[3]，對照組和模型組給予蒸餾水，各組大鼠的給藥容積為10 mL·kg-1，每日上午8：00灌胃，連續灌胃7 d，末次給藥1 h後取材用於各項指標檢測。