2、3 桃紅四物湯對微血管密度（MVD）及Tie-2的影響最後一次灌胃給藥後1 h，腹腔注射35 g·L-1水合氯醛（10 mL·kg-1）麻醉，切開腹腔，取出大鼠子宮組織，將取出的子宮組織浸泡在10%甲醛中，經過石蠟包埋，切片，脫蠟至水，熱修複，3%過氧化氫的PBS封閉內源性過氧化物酶，然後滴加一抗CD34及Tie-2，4 ℃過夜，衝洗，滴加二抗20 min，衝洗，DAB顯色，蘇木精複染，PBS返藍，脫水，封片。顯微鏡下觀察攝片，參照Weidner[7]血管計數方法計數各組的微血管密度。
2、4 桃紅四物湯對Ang-1，Ang-2的影響最後一次灌胃給藥後1 h，腹腔注射35 g·L-1水合氯醛（10 mL·kg-1），切開腹腔，腹主動脈取血，3 500 r·min-1離心10 min，抽取血清，采用酶聯吸附法（ELISA）檢測血清中Ang-1，Ang-2的濃度。
2、5 統計學方法實驗數據均以±s表示。計量資料2組間均數比較用獨立樣本t檢驗，多組間均數比較采用單因素方差分析。應用SPSS 17、0軟件進行統計學處理。
3 結果
3、1 桃紅四物湯對微血管密度（MVD）的影響 CD34定位陽性表達於血管內皮細胞，陽性細胞呈棕黃色顆粒，微血管有的呈管腔狀，有的呈單個內皮細胞或內皮細胞簇。與對照組比較，模型組的微血管密度有顯著性差異（P-1時可以顯著降低血瘀大鼠全血比黏度、血漿比黏度及血清比黏度[8]，具有較好的抗血小板活化作用[9]，同時動物具有較好的耐受能力。因此選擇桃紅四物湯的作用劑量範圍為4、5～18 g·kg-1。
CD34為血管內皮細胞特異性標記物，選擇性表達於血管內皮細胞。CD34選擇性表達於血管內皮細胞有助於對MVD的定量分析，進而反映組織新生毛細血管的生長情況，CD34已被廣泛的用於各種動物及組織中MVD的檢測。本實驗發現造成大鼠子宮內膜出血模型後，大鼠子宮CD34的表達減少，說明大鼠流產後子宮內膜血管遭到破壞，新生血管減少。實驗中陽性組與桃紅四物湯的高、中劑量組大鼠子宮內膜CD34的表達增加，MVD的數值增加，說明桃紅四物湯促進流產出血模型大鼠子宮內膜修複，促進血管的新生。
促血管生成素（Ang）是即VEGF發現後又一類強效調節血管生長和血管穩定的因子，主要有Ang-1和Ang-2 2種亞型。近年來研究表明Ang-1和Ang-2參與胚胎發育、胎盤血管重建、子宮內膜周期性變化等，對女性的正常生殖功能維持有著重要作用。酪氨酸激酶受體（Tie-2）是Ang-1和Ang-2的共同受體，Ang-1和Ang-2不是直接參與調節血管的新生與穩定，而是通過與Tie-2受體的結合，促進Tie-2的磷酸化和競爭性拮抗Tie-2的磷酸化來調節血管的新生與穩定。Ang-1與受體Tie-2結合，促進Tie-2磷酸化，磷酸化的Tie-2受體再通過下遊的途徑促進血管的成熟與穩定，如抑製內皮細胞凋亡；促進內皮細胞出芽、遷移，形成正常的血管樹樣結構；聚集內皮細胞周圍的支持細胞，調節內皮細胞之間、內皮細胞與基質細胞之間的相互作用。Ang-2是Ang-1的天然拮抗劑，Ang-2與Tie-2受體結合能競爭性拮抗Ang-1與Tie-2受體的結合，抑製Tie-2受體的磷酸化，競爭性抑製Ang-1的血管穩定性作用。Ang-2對血管新生的調節作用與其微環境中其他因子的存在與否有著密切關係，當Ang-2的微環境中VEGF不存在時，Ang-2則抑製血管的新生，並促進成熟血管退化。當VEGF存在時抑製Ang-1的血管穩定作用，消除血管基底膜的管周細胞對血管形成的限製，增加血管內皮細胞對VEGF的敏感性，進而促進血管出芽、生長，形成新的血管新枝，促進血管的生成與重建[10]。本實驗研究顯示桃紅四物湯的高、中劑量可以顯著提高子宮內膜中Tie-2的表達，提高血清中Ang-1和Ang-2含量，說明桃紅四物湯促血管新生的作用可能與提高子宮內膜中Ang-1，Ang-2，Tie-2的表達有關，Ang-1，Ang-2與受體Tie-2的結合，促進子宮內膜血管新生、成熟與穩定。
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