微透析樣品：取高中低質量濃度分別為1、60，0、40，0、05 mg·L-1的丹參素標準溶液，每個濃度5個樣品，置自動進樣器（4 ℃）於12 h內進樣，測定
峰麵積值。結果顯示，低中高濃度的峰麵積RSD分別為5、3%，5、1%，8、7%，表明aCSF中的丹參素在12 h內較穩定。
2、8 提取回收率 100 μL空白血漿精密加入不同量的標準品，使丹參素的質量濃度為20、0，2、50，0、31，0、02 mg·L-1，按2、2項下處理樣品，測得血漿中丹參素的提取回收率分別為94、53%，83、3%，82、03%，100、7%，這說明該提取方法的效果較佳。
2、9 基質效應血樣：空白血漿和超純水各100 μL，按照2、2項下處理樣品，不加內標，揮幹後加入標準工作液，揮幹複溶，使丹參素的終質量濃度為20、0，0、63，0、02 mg·L-1，分別記錄峰麵積為A1，A2。內標（0、50 mg·L-1）同時進行考察，見表2。血漿中的丹參素基本無基質效應。
微透析樣品：分別使用空白aCSF、純水稀釋丹參素溶液，使丹參素的質量濃度分別為1、60，0、40，0、05 mg·L-1，數據結果顯示，aCSF中的丹參素存在基質效應，基質效應因子（matrix factor，MF）皆為60%左右，說明基質效應對所測定的丹參素濃度範圍內的影響較一致，數據比較穩定；且目前情況下可以滿足實驗檢測靈敏度的需要，所以當前方法是可實際應用於本項研究的。
2、10 探針回收率探針平衡1、5 h後，空白aCSF換成含0、8 mg·L-1丹參素的aCSF，采樣時間為10 min，連續收集4份樣品。按以下公式[14]進行計算：Rdial = （Cperf·Cdial）/Cperf。式中Cperf為灌流中的藥物濃度，Cdial為透析液中的濃度。根據上述公式，本實驗的探針平均回收率為19、27%。
3 藥代動力學研究
取SD雄性大鼠（n=4），20%烏拉坦腹腔注射麻醉（1、2 g·kg-1），仰位固定於鼠板，去毛後在頸部偏右側位置切口，鈍性分離頸靜脈，頸靜脈埋管取血。打開ABS采血儀及其軟件，使用10 U肝素鈉溶液灌流采血儀的整個管路，設置采血時間點（5，15，30，60，90，120，180，240，300 min），采血量為250 μL/時間點。將動物與儀器連接，待給藥後，立即啟動自動采血。
繼上述手術後，轉移至腦立體定位儀，固定大鼠頭部。顱頂皮膚消毒、被皮，劃開頭蓋骨皮膚，暴露顱骨，按照大鼠腦立體定位圖譜[15]，以前囟為定位基點，於左側大腦側腦室位置（AP：-0、8 mm，ML：-1、6 mm）定位後，鑽孔、緩慢小心地植入探針（DV：-6、0 mm）。以空白aCSF 2、0 μL·min-1的流速灌流，探針平衡1、5 h之後股靜脈注射丹參素（50 mg·kg-1，2 mL·mL-1），樣品收集時間為10 min，持續收集4 h。實驗結束後，脊椎脫臼處死大鼠，斷頭取腦，切片觀察探針取樣位置，若發現探針錯位則實驗結果不計。
測定腦內、血漿中丹參素濃度，繪製藥時曲線，4。運用WinNonlin軟件（版本 6、1，美國Pharsight Corporation）以非房室模型計算其主要的代謝動力學參數，見表3。
4 討論
4、1 分析條件的優化本研究選擇乙腈、0、03%甲酸為流動相，使用MRM掃描方式，丹參素具有較好的峰形及質譜行為；采用梯度洗脫方式，使分析周期減至7、5 min。選擇aCSF作為微透析灌流液，其中含較高量的無機鹽離子，這些離子會影響丹參素在LC-MS中的離子化，即產生基質效應。通過0、03%甲酸溶液稀釋後（1∶2），丹參素在aCSF中的MF由40%變為60%以上，說明0、03%甲酸稀釋可降低其
血中丹參素藥時曲線（n=4）
Fig、3 Concentration-time curves in blood after iv administration of Danshensu （n=4）
腦內丹參素藥時曲線（n=4）
Fig、4 Concentration-time curves in brain after iv administration of Danshensu （n=4）
基質效應。進行血樣提取時，發現未加10% HCl時，血漿中的丹參素很難被萃取出來；而添加100 μL 10% HCl經乙酸乙酯進行萃取後，能使血漿中的丹參素有較高的提取回收率（80%以上）。
4、2 丹參素在大鼠體內的動力學研究腦內藥物藥動學研究，通常采用全腦勻漿法，但是腦內含大量的雜質，對檢測結果幹擾很大。MD技術具有樣品無需前處理，可直接進樣分析[8]；可連續采樣，所需的實驗動物少；采樣體積少，不影響實驗動物的正常生理狀態等優勢。MD獲得的是藥物遊離濃度，遊離藥物濃度與藥效成正比，更具有臨床意義。通常以眼內眥、剪尾、頸靜脈插管等方式[16]進行血液采樣。與前述方法相比較而言，自動采血技術可減少動物應激反應；可在動物清醒狀態進行采樣；在采血的同時補充適量的生理鹽水（而樣品不被稀釋），保證實驗動物的正常生理狀態；準確記錄采血時間，精確控製采血量；可減少或避免血樣中混入組織液。ABS可與MD聯用[17]，實現血液與腦組織同時采樣，可更全麵的了解藥物在體內的藥動學特性。
靜脈注射後，丹參素迅速入血，並通過BBB進入側腦室，血漿中、腦內的丹參素消除速率常數分別為0、04，0、018 min-1，前者約為後者的2倍，說明血漿中的丹參素比腦內的丹參素消除速度快。丹參素在血液中的t1/2為16、64 min，結果與前人報道基本一致[18]，說明丹參素迅速向各組織分布[19]，同時也表明了自動采血技術可很好地反映丹參素在血漿中的動力學行為。丹參素是丹參酚酸類成分之一，較易透過BBB[20]，在腦內的t1/2為58、76 min。丹參素體內的藥代參數數據為丹參素的藥動學行為特征、藥物靶向器官變化、藥物作用物質基礎、PK-PD研究、配伍機製研究提供實驗依據。
本實驗建立了大鼠體內丹參素MD-ABS-LC-MS/MS研究方法，該法簡便、穩定，為丹參素在血液中、腦內的藥動學研究提供實驗數據；同時為微透析技術與自動采血技術聯用研究藥物在血液與腦內的藥動學行為提供可借鑒的方法。
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