2、6、4 回收率實驗取冰片對照品溶液置於180 μg空白腦漿中，配製成含低、中、高濃度的腦勻漿樣品，按2、5、1項下方法處理。另以水代替腦漿，平行以上操作，對所有樣品進行測定。計算萃取回收率，低、中、高濃度分別為（94、92±0、96）%，（97、46±1、77）%，（88、15±6、38）%。
2、6、5 穩定性實驗配製低、中、高3個質量濃度的腦勻漿樣品，凍存在-20 ℃，分別於第1，4，7天取出，處理並測定。結果RSD分別為4、56%，4、46%，4、08%，1周內的凍存穩定性良好。
2、7 血漿測定方法學驗證
2、7、1 專屬性考察在上述色譜條件下，冰片和十八烷分離度良好，保留時間分別為7、53，13、91 min。
A、空白血漿；B、空白血漿中加冰片對照品（5、64 mg·L-1）；C、大鼠血漿樣品； 1、冰片；2、十八烷。
圖2 血漿中冰片氣相色譜圖
Fig、2 Chromatograms obtained from borneol in rats plasma
2、7、2 標準曲線取大鼠空白血漿180 μL，加入20 μL不同濃度的冰片係列標準溶液，得到含冰片的質量濃度分別為0、056，0、11，0、56，1、13，2、26，5、64，11、28 mg·L-1的血漿，然後按照2、5、2項下方法處理並進樣分析。以冰片與十八烷峰麵積比值Y對冰片質量濃度X進行線性回歸，回歸方程為Y=0、138 6X+0、019 5，r=0、998 3。線性關係在0、022 6 ～18、04 mg·L-1良好，最低定量限為0、022 6 mg·L-1。
2、7、3 精密度實驗取大鼠空白血漿180 μL，加入冰片標準溶液配製成低、中、高（0、563 9，5、639，11、28 mg·L-1）3個質量濃度的血漿樣品，按2、5、1項下方法處理後分析，進行方法的精密度試驗，低、中、高濃度日內精密度分別為0、32%，3、4%，4、4%，日間精密度分別是2、5%，3、1%，6、5%。
2、7、4 回收率實驗取大鼠空白血漿180 μL，加入冰片標準溶液配製成低、中、高3個質量濃度的血漿樣品，按2、5、2項下方法處理。另以水代替血漿，平行以上操作。測定後計算萃取回收率，低、中、高濃度分別為（104、05±7、72）%，（106、19±8、49）%，（100、48±1、87）%。
2、7、5 穩定性實驗配製低、中、高3個質量濃度的腦勻漿樣品，凍存在-20 ℃，分別於第1，3，7天取出，處理並測定。結果RSD分別為2、5%，4、9%，3、8%。1周內的凍存穩定性良好。
2、8 數據處理
所有數據都表示為±s，繪製藥物濃度-時間曲線，並用Kinetica 4、4軟件對數據進行非房室模型擬合計算藥代動力學參數，采用SPSS軟件進行獨立樣本t-檢驗進行統計學對比分析。
3 結果
3、1 藥-時曲線
腦中風大鼠再灌胃醒腦靜口服混懸液後腦中及血漿中的藥物濃度-時間曲線，血藥濃度-時間曲線呈現單峰，在30 min 左右達到1、8 mg·L-1，而腦藥濃度-時間曲線除在30 min 達峰外，但在60 min後的消除速率較血中變慢；假手術組的結果如圖3B所示，腦藥和血藥濃度-時間曲線趨勢與中風組相似，但Cmax有所降低，Tmax向後延遲。
3、2 藥動力學參數
醒腦靜口服製劑中冰片在不同組別的藥動學參數，其中Te為腦/血藥物比，Te= AUCbrain/AUCblood × 100%。從表可知，腦中風大鼠的腦、血中的Cmax和AUC0-t分別為（1、82±0、825），（1、35±0、43） mg·L-1和（123、39±55、82），（87、91±39、81）mg·L-1·min，Te達到（71、3±3、24）%；而在假手術組中，腦組織中的Cmax和Te顯著減小，為（0、89±0、59） mg·L-1和（60、71±9、34）%，血漿中的t1/2和MRT則顯著變大，其他藥動學參數與中風組無顯著性差異。
A、腦中風組；B、假手術組。
大鼠口服醒腦靜後冰片腦藥-時間及血藥-時間曲線（n=5）
Fig、3 The brain concentration-time curve and plasma concentration-time curve of borneol in rats after oral administration of XNJ （n=5）
4 討論
冰片作為脂溶性的萜類小分子成分，易透過各類生理屏障，在血中和腦中都可以被迅速的吸收並代謝。研究報道單味灌胃冰片後，血中藥物可以在20 min內達峰，生物利用度為43%左右[10-11]；而複方給藥後，其中的冰片仍能較快的被吸收，也呈現明顯的單峰現象[12-13]。本實驗中冰片在30 min左右達到最高血藥濃度，並在120 min內被代謝90%以上。對於冰片腦藥動力學的研究表明冰片可迅速透過血腦屏障，30 min左右達峰，但在60 min後的消除速率較血中變慢，這可能因為冰片吸收入血後，最初被貯存到脂肪組織的藥物，隨著藥物代謝的進行會被轉移回血液中，並被再次分布到腦部，因而減緩了腦藥濃度的下降趨勢。有文獻報道[14] 冰片在腦中的代謝呈現顯著的雙峰現象，這種結果的差異可能是由給藥劑量、實驗動物、溶媒選擇等因素的不同所引起的。整體來看，2組中冰片的血藥濃度要略高於腦藥濃度，這與Xiao [15]研究的小鼠在灌胃磷酸川芎嗪片後，腦藥濃度顯著大於血藥濃度有所不同，這可能是由於不同複方中所含的其他成分對冰片的
代謝所產生的影響亦不相同，使冰片在腦中的分布有所差異。
通過中風及假手術2組實驗數據的對比可以發現，腦中風組的腦中的Cmax和Te明顯高於假手術組，而在血中的Cmax，AUC0-t沒有顯著性差異，這表明腦中風的病理狀態對於大鼠灌胃醒腦靜後冰片在血液中的藥物濃度影響不大，但可以顯著增加腦藥濃度。有研究表明[16]，腦中風的發作會損傷和改變血腦屏障的結構，王興盛等[17]發現在腦缺血2 h再灌注24 h後膠質細胞先發生腫脹和退行性變，內皮細胞特征性改變並且細胞間隙增大。本研究證實腦中風引起的血腦屏障通透性的改變使更多冰片快速進入腦部。同時，腦中風大鼠的血中的t1/2和MRT較假手術組減少，而在腦中2個參數差異不顯著。說明腦中風的發生加快了冰片在血中的代謝消除過程，也可能是進入腦部藥物量的增加使血藥濃度下降迅速。具體導致參數變化的機製還有待進一步研究。
本實驗結果表明了病理狀態下冰片的腦藥、血藥動力學和腦中風對其入腦能力的影響，為冰片的使用以及醒腦靜口服製劑的研究提供了參考。
[參考文獻]
[1] Meairs S， Wahlgren N， Dirnagl U， et al. Stroke research priorities for the next decade——a representative view of the European scientific community [J]. Cerebrovasc Dis， 2006， 22（2/3）：75.