貯藏條件和時間對灰氈毛忍冬藥材質量的影響
資源與鑒定
作者：馬鵬 李隆雲 張應
[摘要]研究不同貯藏條件和時間對灰氈毛忍冬質量的影響。采用不同貯藏包裝：塑料袋抽真空包裝、塑料包裝、編織袋包裝、編織袋具內膜密封包裝、紙袋包裝、麻袋包裝；不同貯藏方法：常溫、5 ℃冰箱、低溫-20 ℃冰箱 、常溫幹燥器等進行組合共24批樣品。於不同時間測定其中有效成分的變化。實驗結果表明各貯藏組藥材中成分含量變化與貯藏時間、貯藏條件（貯藏環境、包裝方式）有關。在相同的貯藏時間下，貯藏環境（溫度、濕度）對藥材質量穩定性影響其關係依次為：低溫-20 ℃左右冰箱>5 ℃左右冰箱>常溫幹燥器組>常溫組；包裝方式對藥材質量穩定性影響其關係依次為：塑料袋抽真空包裝>編織袋具內膜密封包裝>塑料袋包裝>編織袋包裝>麻袋包裝>紙袋包裝。在相同的貯藏條件下，隨著貯藏時間的延長，各貯藏條件組藥材的成分除咖啡酸含量會逐漸增高外，其餘5個有效成分的含量逐漸減少。貯藏時間對山銀花的內在質量 （化學成分含量）和外觀色澤 （生黴 、生蟲、變黃、變黑等 ）均有顯著影響。從藥材有效成分穩定性、藥材外觀色澤變化、節約貯藏成本及提高藥材等級和售價等方麵綜合考慮，灰氈毛忍冬藥材以低溫（5 ℃）、避光（具黑色內膜）、密封貯藏不超過24個月為宜。
[關鍵詞]灰氈毛忍冬；貯藏時間；貯藏方式；HPLC；藥材質量
灰氈毛忍冬Lonicera macranthoides Hand. -Mazz.是忍冬科忍冬屬植物，其幹燥花蕾和初開花具有清熱解毒，涼散風熱的功效，《中國藥典》將其收載為山銀花藥材源植物之一[1]。灰氈毛忍冬在我國西南、中南地區大量種植，與金銀花商品藥材源植物忍冬L. japonica Thunb相比，具有資源豐富，產量高等特點，在金銀花類藥材中占有較高的市場份額[2]。
近年來，對灰氈毛忍冬的扡插、加工方法、采收時間等對灰氈毛忍冬化學成分影響研究報道較多[3-9]，但儲藏條件和儲藏時間對灰氈毛忍冬藥材質量影響的研究未見報道。本研究係統探討了儲藏條件和儲藏時間對灰氈毛忍冬藥材質量的影響，為製定灰氈毛忍冬藥材合理的儲藏措施提供理論依據。
1 材料
1.1 樣品
樣品采摘自重慶秀山縣灰氈毛忍冬GAP種植基地，經重慶市中藥研究院李隆雲研究員鑒定為忍冬科忍冬屬植物灰氈毛忍冬L. macranthoides 的花蕾或初開的花，蒸汽殺青後經高溫烘幹機幹燥備用。
1.2 儀器
島津LC-20AT高效液相色譜儀，SPD-M20A二極管陣列檢測器，Lcsolution色譜工作站，HP LaserJet 1020激光打印機，昆山市超聲儀器有限公司KQ-250B型超聲波清洗機，水浴鍋（北京市長風儀器儀表公司（CF長風）），1/1萬電子天平（德國賽多利斯BT-224s），1/10萬電子天平（日本島津LIBROR AEG-45S）。冰箱，超低溫冰箱，普通幹燥器。安捷倫1200高效液相色譜儀， Alltech ELSD 2000ES蒸發光散射檢測器。
1.3 試劑與試藥
綠原酸、咖啡酸、木犀草苷對照品購自中國食品藥品檢定研究院，批號分別為110753-200413，110885-200102，111720-200602。3，5二咖啡酰奎寧酸購自成都曼思特生物科技有限公司，純度>98%（HPLC）。灰氈毛忍冬皂苷乙和川續斷皂苷由中國藥科大學李萍教授提供，純度>95%（HPLC）。流動相為色譜純，其餘試劑為分析純。
2 方法
2.1 儲藏
取供試樣品50 g，精密稱定。設置6種包裝：塑料袋抽真空、塑料、編織袋、編織袋具內膜密封、紙袋、麻袋；每種包裝平行稱取4份。其中真空包裝的每袋10 g裝量，共裝20袋。每種包裝的樣品分別置於4種儲藏方法：常溫、5 ℃左右冰箱、低溫-20 ℃左右冰箱、常溫幹燥器，共24個處理，在貯藏前對樣品中有效成分的含量按本文方法進行初始測定，樣品中綠原酸質量分數10.011%，咖啡酸0.032 8%，木犀草苷 0.046 9%，3，5二咖啡酰奎寧酸 15.593%。灰氈毛忍冬皂苷乙 7.263%、川續斷皂苷乙 1.589%。並照《中國藥典》2010年版附錄Ⅸ H第一法測定供試藥材的初始含水量為11.73%。24個處理分別於貯藏3，6，12，18，24個月後的測定樣品中有效成分的含量。
2.2 綠原酸、咖啡酸、木犀草苷、3，5二咖啡酰奎寧酸含量測定
2.2.1 色譜條件 Phenomenex Synergi Hydro-RP 80A C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，4 μm）；流動相乙腈（A）-0.4%磷酸水溶液（B），梯度洗脫，0～10 min，14% A；10～20 min，14%～20% A；20～30 min，20% A；30～40 min，20%～70% A；40～45 min，70%～90% A；45～60 min，90%～14% A；流速 1 mL·min-1；檢測波長 327，322，437，327 nm，進樣量 10 μL。
2.2.2 線性關係考察 精密稱取綠原酸、咖啡酸、木犀草苷和3，5二咖啡酰奎寧酸對照品適量，分別加甲醇製成含綠原酸0.004 9 g·L-1、咖啡酸0.002 1 g·L-1、木犀草苷0.002 4 g·L-1、3，5二咖啡酰奎寧酸0.001 6 g·L-1對照品溶液。分別吸取以上4種對照品溶液各0.5，1，5，10，20 μL進樣分析。以進樣量（X）為橫坐標，峰麵積（Y）為縱坐標，進行線性回歸，綠原酸回歸方程Y= 2.275 079E-007X+2.765 879 7E-003，r=0.999 9，線性範圍為0.024 5～0.98 g·L-1；咖啡酸回歸方程Y=2.591 248E-007X+6.364 204E-003，r=0.999 8，線性範圍為0.010 5～0.42 g·L-1；木犀草苷回歸方程Y=1.793 146E-007X-9.420 646E-004，r=0.999 9，線性範圍為0.012～0.48 g·L-1；3，5二咖啡酰奎寧酸回歸方程Y=3.189 356 2E-007X+2.734 681 5E-003，r=0.999 9線性範圍為0.008～0.32 g·L-1。
2.2.3 灰氈毛忍冬皂苷、川續斷皂苷含量測定 參照《中國藥典》2010年版第一部山銀花項下含量檢測方法[1]。精密稱取灰氈毛忍冬皂苷乙對照品、川續斷皂苷乙對照品適量，加50%甲醇溶解製成灰氈毛忍冬皂苷乙0.000 7 g·L-1、川續斷皂苷乙0.000 2 g·L-1的對照品溶液。分別精密吸取對照品溶液2，10 μL，供試品溶液5～10 μL，注入液相色譜儀，測定。以外標兩點法計算綠原酸的含量，以外標兩點法對數方程計算灰氈毛忍冬皂苷乙、川續斷皂苷乙的含量。
3 結果與分析
3.1 包裝方法和貯藏時間對有機酸類的影響
3.1.1 綠原酸 采用不同包裝，儲藏在不同的溫度下，其綠原酸含量，隨著儲藏時間的延長，綠原酸含量逐漸下降。用塑料袋和抽真空的塑料袋儲藏1年，其綠原酸含量變化不大，以5～-20 ℃下變化更小；在5～-20 ℃下，用抽真空的塑料袋儲藏藥材2年，其綠原酸含量變化幅度不大，溫度越低，其含量下降越少。采用具內膜密封編織袋在5～-20 ℃下儲藏1年，其綠原酸含量變化基本沒有變化；在-20 ℃下藏藥材2年，其綠原酸含量變化幅度不大。采用編織袋在常溫下儲藏半年，其綠原酸含量顯著下降；采用紙袋和麻袋包裝儲藏，在常溫下儲藏半年，其綠原酸含量變化較少。采用紙袋、編織袋和麻袋包裝儲藏，在-20 ℃下儲藏18個月，其綠原酸含量變化不大。不同包裝儲藏試驗結果表明，置於真空、密閉和幹燥條件下，能明顯減緩綠原酸含量的下降趨勢。在相同的包裝條件下，溫度越高，綠原酸越不穩定，溫度越低，如-20 ℃，在24個月裏，綠原酸的含量幾乎無變化，說明，溫度越低，越有利於藥材的保存。儲藏24個月後，不同材料包裝中綠原酸含量衰減率分別為：塑料袋抽真空包裝 14.3%、塑料包裝 16.1%、編織袋包裝 46.5%、編織袋具內膜密封包裝 22.3%、紙袋包裝 31.2%、麻袋包裝 32.9%。