基於羥基磷灰石的丹酚酸組分磷脂複合物共沉澱物的製備研究
製劑與炮製
作者：陳小雲 張振海 劉丹 孫娥 賈曉斌
[摘要]該實驗旨在製備丹酚酸組分磷脂複合物的羥基磷灰石（HA）共沉澱物，以提高藥物的體外溶出，同時改善丹酚酸組分磷脂複合物的粉體學性質。首先采用溶劑法製備共沉澱物，以丹酚酸組分中的丹酚酸B和丹參素為指標成分考察其體外溶出，同時對其進行粉體學性質的考察，並利用DSC，XRD，FTIR等表征手段對其結構特征進行分析研究。結果可得丹酚酸組分磷脂複合物與羥基磷灰石按1∶2製備的共沉澱物的體外溶出效果較好，60 min時藥物的體外累積溶出率達到90%以上；粉體學性質考察結果表明該共沉澱物流動性良好，吸濕性低，粉體學性質得到了較大的改善，微觀結構的表征分析表明藥物仍舊以非晶形式存在。該實驗的製備工藝簡單可行，具有實際應用價值。
[關鍵詞]丹酚酸組分磷脂複合物； 羥基磷灰石； 共沉澱物； 粉體學性質
中藥組分多成分特點決定其生物藥劑學性質外在表觀的複雜性，采用單一製劑手段改善組分中多成分性質，未能完全解決組分藥劑學性質存在的問題[1]。本課題組前期實驗[2]研究采用磷脂複合物技術改善丹酚酸組分透膜吸收差的理化性質，結果表明以大豆磷脂為製劑輔料製備的丹酚酸組分磷脂複合物能一定程度上改變丹酚酸組分的理化性質，提高了藥物的親脂性，但所製備的丹酚酸組分磷脂複合物黏度較大，製劑時難於混合均勻，同時導致體外溶出有所降低。為此，本課題組進一步研究將固體分散技術[3-4]引入磷脂複合物中，以羥基磷灰石為輔料製備共沉澱物，以改善磷脂複合物的粉體學性質，提高藥物的體外溶出度。
1 材料
Agilent 1200高效液相色譜儀（包括四元泵，自動進樣器，DAD二極管陣列檢測器）， ZRS-8G型智能溶出試驗儀（天津大學無線電廠）；EyeTech-激光粒度粒形分析儀（荷蘭安米德Ankersmid有限公司）；DSC204差示掃描量熱儀（德國Netzsch公司）；D8型X-射線衍射儀（德國Bruker公司）；470-傅立葉紅外光譜儀（美國Nicolet公司）；UV-2450型紫外分光光度儀（日本島津）。
丹酚酸組分（含量>70%，其組成為10.92%丹參素、50.2%丹酚酸B，西安小草植物科技有限責任公司，批號20121204）；丹酚酸B，丹參素對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號分別為111562-200807，110855-200504）；羥基磷灰石（南京埃普瑞納米材料有限公司，批號EM110917314，純度99%，粒徑為20 nm）；無水乙醇等試劑均購自國藥集團化學試劑有限公司。乙腈為色譜純，水為高純水，其餘試劑均為分析純。
2 方法與結果
2.1 丹酚酸指標成分的含量測定
2.1.1 色譜條件 Hedera ODS-2 C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相乙腈-水-甲酸（85∶15∶0.1）；流速1.0 mL·min-1，柱溫30 ℃。檢測波長281 nm。
2.1.2 標準曲線的製備 精密稱取丹參素對照品3.69 mg，丹酚酸B對照品10.04 mg分別置於50 mL量瓶中，用70%甲醇定容至刻度，得質量濃度為73.80，200.08 mg·L-1的對照品溶液。分別精密吸取對照品溶液0.5，1.0，2.5，4.0，5.0，7.5 mL至10 mL量瓶中，用70%甲醇稀釋並定容至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜過濾，取續濾液，進行HPLC測定其對應的峰麵積，以質量濃度為橫坐標，對應的峰麵積為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程：丹參素y=5.911 6x+11.828，r=0.999 7；丹酚酸B y = 9.736 3x-63.733，r=0.999 6。結果表明，各指標成分在測定濃度範圍內線性關係良好。
2.1.3 精密度試驗 精密吸取對照品溶液，重複進樣6次，測定其峰麵積，得丹參素、丹酚酸B的RSD 分別為2.0%，1.4%，表明該方法精密度良好。
2.1.4 穩定性試驗 精密吸取對照品溶液，分別在0，2，4，6，8，12 h進樣，測定其峰麵積值，得丹參素、丹酚酸B的RSD分別為1.9%，2.2%，表明該對照品溶液在12 h內穩定。
2.1.5 重複性試驗 精密稱取同一份丹酚酸磷脂複合物及其羥基磷灰石共沉澱物各6份，平行配製一定濃度的6份供試品溶液，分別進樣，測定峰麵積，丹酚酸磷脂複合物中丹參素、丹酚酸B的RSD分別為1.2%，1.7%；共沉澱物中丹參素、丹酚酸B的RSD分別為1.6%，1.9%，表明重複性均良好。
2.1.6 回收率試驗 精密稱取已知含量的丹酚酸磷脂複合物及其羥基磷灰石共沉澱物，製備成供試品溶液6份，分別加入丹參素和丹酚酸B對照品溶液適量，精密吸取混合溶液1 mL，用70%甲醇定容至10 mL，分別進樣，測定並計算平均回收率和RSD。丹酚酸磷脂複合物中丹參素、丹酚酸B的平均回收率分別為99.01%，98.87%，RSD分別為1.4%，2.0%；共沉澱物中丹參素、丹酚酸B的平均回收率分別為100.7%，98.49%，RSD分別為1.5%，2.2%。
2.2 丹酚酸磷脂複合物與羥基磷灰石共沉澱物的製備及體外溶出試驗
2.2.1 共沉澱物的製備 根據本課題前期實驗基礎，稱取丹酚酸組分100.0 mg和大豆磷脂150.0 mg溶於20.0 mL四氫呋喃中，40 ℃條件下反應3 h後，減壓除去反應溶劑，再加入適量的二氯甲烷，充分溶解其中的磷脂及複合物，抽濾，同時濾液再次減壓幹燥，蒸幹即得丹酚酸組分磷脂複合物。稱取所製備的丹酚酸組分磷脂複合物適量，加入適量無水乙醇溶解，按複合物與載體質量比為1∶0.5，1∶1，1∶2，1∶3精密稱取羥基磷灰石，分散於上述溶液中，充分混勻，40 ℃減壓條件下，旋轉蒸發除去溶劑，幹燥，研磨，過80目篩，即得，置幹燥器內保存備用。
2.2.2 溶出度測定 按《中國藥典》2010年版二部規定的槳法測定，稱取適量丹酚酸磷脂複合物和不同比例的共沉澱物分別裝於膠囊中，置於900 mL的適量水中，轉速50 r·min-1，介質溫度（37.0±0.5） ℃，分別於5，10，20，30，40，60，90，120 min定時移取溶液5 mL，同時補以等體積等溫度釋放介質，0.45 μm 微孔濾膜過濾，精密量取10 μL，注入液相色譜儀中，記錄峰麵積，計算樣品濃度，得出對應時間點藥物的累積溶出率。