銀杏內酯組分固體分散體微丸釋藥單元的製備
製劑與炮製
作者：劉丹 張振海 陳小雲 賈曉斌
[摘要]將微晶纖維素和殼聚糖聯合應用於銀杏內酯組分固體分散體（GKS）微丸的製備，考察銀杏內酯組分微丸的溶出性。以微晶纖維素-殼聚糖為複合載體，采用溶劑法製備銀杏內酯組分固體分散體，借助差示掃描量熱（DSC）對其進行製劑表征，進一步采用擠出滾圓法製備銀杏內酯組分微丸釋藥單元，考察比較不同類型、不同劑量的黏合劑、載藥量和崩解劑對製備銀杏內酯組分微丸釋藥單元影響，采用正交設計試驗優化製備工藝。微晶纖維素和殼聚糖按1∶3製備的GKS固體分散體，60 min時藥物的體外累積溶出率達到80%以上，銀杏內酯組分微丸釋藥單元能顯著改善GKS的溶出，具有實際應用價值。
[關鍵詞]銀杏內酯組分；微丸；固體分散體；釋藥單元；溶出度
中藥（複方）的多組分多性質使得中藥多元釋藥係統應運而生，這種區別於單一劑型的多元化的新型給藥係統，是中藥多組分集合體的製劑，其中包含多個組分釋藥單元，以達到中藥多組分協同起效的最佳狀態[1-6]。微丸是一種球狀多單元釋藥體係，其釋藥行為獨立且整體比較穩定，對於多單元製劑而言是理想的整合製劑技術手段。
銀杏提取物對治療心腦血管類疾病具有很好的療效，但是其口服生物利用度低，銀杏提取物主要藥效組分包括銀杏黃酮組分和銀杏內酯組分。本文以銀杏內酯組分為模型，製備單元釋藥係統，為下一步整合銀杏葉多組分（銀杏內酯黃酮組分與內酯組分）多元釋藥係統製劑打下基礎，也希望為中藥組分製劑研究提供參考。本實驗在研究銀杏內酯組分生物藥劑學性質的基礎上[7]，發現銀杏內酯組分溶解性很差、滲透性良好。銀杏內酯組分溶出差很可能是導致銀杏內酯組分口服利用度低的主要因素之一，采用固體分散體技術可以有效的解決這個問題，最終以微丸的載藥形式作為銀杏內酯組分釋藥的最終給藥形式。
1 材料
銀杏內酯組分（GK）[銀杏內酯A，B總量為94.89%，其組成為30.47%銀杏內酯A（GA），64.42% 銀杏內酯B（GB），由江蘇康緣藥業股份有限公司提供，批號110817]；銀杏內酯A，銀杏內酯B對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號分別為100862-200608，110863-200508）；乙醇（南京化學試劑有限公司）；殼聚糖（CTS，上海滬宇生物有限公司）；微晶纖維素（MCC，山東聊城阿華製藥有限公司，型號PH101 MCC）；α-乳糖 （汕頭市西隴化工廠有限公司）；羧甲基澱粉鈉（CMS Na，安徽山河藥用輔料有限公司）；交聯聚維酮 （PVPP，安徽山河藥用輔料有限公司）；球形微丸造粒機（上海華東理工大學）；D-800LS智能藥物溶出儀（天津大學無線電廠製造）；DSC204差熱分析儀（德國 Netzsch公司）；BP-211D分析電子天平（德國Sartorius公司，1/10萬）；TG L2 16C台式離心機 （上海安亭科學儀器廠）；Agilent 1100 高效液相色譜儀。
2 方法與結果
2.1 供試品製備
2.1.1 殼聚糖的預處理 分別稱取各相對分子質量的殼聚糖溶於水，加檸檬酸調pH 6.0，減壓蒸幹溶劑，真空幹燥，研細過80目篩，備用。
2.1.2 固體分散體製備方法 采用溶劑法製備銀杏內酯組分-殼聚糖固體分散體，分別將銀杏內酯組分、微晶纖維素以及殼聚糖溶解於無水乙醇中，室溫條件下，超聲溶解45 min，再將超聲後的微晶纖維素與殼聚糖混合，繼續常溫超聲溶解45 min，最後將3者混合超聲溶解45 min後，轉入旋轉蒸發儀中除去溶劑，取出固體粉末，幹燥即得。
2.1.3 物理混合物的製備 將銀杏內酯組分原料藥、微晶纖維素與殼聚糖混合均勻，置於研缽中研細即得。
2.2 溶出試驗
2.2.1 色譜條件 Agilent SB-C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流動相甲醇-水（28∶72）；柱溫 35 ℃；流速1.0 mL·min-1。蒸發光散射檢測器，蒸發口溫度 105 ℃，霧化口溫度70 ℃，漂移管溫度 30 ℃，載氣流速2.8 L·min-1。
2.2.2 標準曲線的繪製 配製銀杏內酯A和銀杏內酯B質量濃度分別為 507，633 mg·L-1的原液，進一步用甲醇稀釋，稀釋倍數分別為2，5，10，20，50，配製成一係列不同質量濃度的混合對照品溶液。混合對照品溶液銀杏內酯A的質量濃度分別為253.5， 101.4， 50.7， 25.35， 10.14 mg·L-1，銀杏內酯B質量濃度分別為316.5， 126.6， 63.3， 12.66， 6.33 mg·L-1。按2.2.1項色譜條件，各濃度對照品溶液分別進樣10 μL，用HPLC-ELSD測定峰麵積，以峰麵積對數 lnA對進樣量對數lnM作線性回歸，得回歸方程，銀杏內酯A：lnA=0.996lnM+6.980，R2=0.999 8，線性範圍10.14～253.5 mg ·L-1；銀杏內酯B：lnA=0.994lnM+6.851，R2=0.998 8，線性範圍12.66～316.5 mg ·L-1。
2.2.3 藥物的溶出度測定 精密稱取供試品，按溶出度測定方法（《中國藥典》2010年版二部附錄XC槳法），以0.5%十二烷基硫酸鈉溶液900 mL為溶出介質，轉速50 r·min-1，溫度（ 37±0.5） ℃，分別於固定時間取樣5 mL（同時補加同溫度等量溶出介質），以0.8 μm微孔濾膜過濾，取續濾液10 μL進行HPLC測定，測定結果代入標準曲線計算濃度，並換算成累積溶出率。
2.3 二元固體分散體處方優化
以累計溶出率為考察指標優選銀杏內酯組分原料藥固體分散體，以微晶纖維素和殼聚糖3000為二元載體製備銀杏內酯組分，微晶纖維素、殼聚糖3000和銀杏內酯組分比例分別為1∶1∶1，1∶3∶3，1∶5∶5的固體分散體，並對其進行溶出度實驗考察，比較不同比例條件下，二元載體對銀杏內酯組分原料藥的影響。按2.2.3項下藥物溶出度方法，於10，20，40，60，80，100 min取樣分析，隨著載體比例的增加，銀杏內酯組分的累積溶出率增大，其中1∶3∶3，1∶5∶5的累積溶出率與銀杏內酯組分原料藥比較都有很明顯的提高。
2.4 差示量熱掃描分析 （DSC）
測試條件為鋁坩堝；氣氛氮氣；升溫速率10.00 ℃· min-1 ；升溫範圍0～500 ℃，分別對銀杏內酯組分原料藥、殼聚糖 、微晶纖維素、銀杏內酯組分物理混合物（1∶3∶3）及銀杏內酯組分固體分散體（1∶3∶3）。銀杏內酯組分原料藥的DSC曲線表現出4個不同的特征峰：第一個峰值為125.1 ℃，第二個在345.0 ℃，第三個在370.9 ℃，最後的峰值為387.5 ℃。殼聚糖3000的一個特征峰在219.8 ℃，MCC的一個特征峰在337.3 ℃。銀杏內酯組分、殼聚糖3000及MCC的物理混合物的DSC曲線中銀杏內酯組分的特征峰還是依然存在。然而，在銀杏內酯組分二元固體分散體中明顯表現出2種不同的類型的吸熱特征峰。第一個峰值為98.2 ℃，這個吸熱峰的是溫和的，這表明這個峰值的形成可能是由於固體分散體中銀杏內酯組分-殼聚糖的熱運動而形成的遷移。第二個吸熱特征峰值（321.3 ℃）是殼聚糖3000或MCC的特征峰。這說明銀杏內酯組分在固體分散體中出現了物理狀態的轉換由晶型過渡到了一種非晶態或部分無定形的狀態。