波棱素脂質體的製備工藝及處方優化研究
製劑與炮製
作者：張鑫 譚睿 顧健 何黎黎 樊利娜 南星梅
[摘要]波棱素是波棱瓜子中的木脂素分離出來的活性單體成分，其具有抗肝損傷、抑製乙型肝炎病毒複製的作用。該實驗首次采用薄膜分散法成功製備了波棱素脂質體，以包封率為指標，對處方工藝進行優化。優化後的最佳膜材處方為波棱素-大豆磷脂-膽固醇 2.44∶78.05∶19.51，選用0.5%普流尼克（F68）溶液50 ℃下進行水合脫膜，並水浴超聲時間20 min，製備得到的波棱素脂質體平均包封率為（94.50±2.15）%，粒徑（119.2±10.7） nm，達到試驗預期，這將為後期的肝靶向給藥係統的研究奠定基礎。
[關鍵詞]波棱素；脂質體；製備工藝；處方優化
波棱瓜子係葫蘆科波棱瓜屬植物波棱瓜Herpetospermum caudigerum Wall.的幹燥成熟種子[1]。它是常用的藏藥，主治肝炎、膽囊炎等疾病，亦有治療消化不良、清熱解毒之功效[2-3]。波棱素（herpetin， HPT）是波棱瓜子中的木脂素分離出來的活性單體成分，藥理學活性研究表明，其具有抗肝損傷、保肝降酶、抑製乙型肝炎病毒複製的作用[4]。HPT在水中的溶解度很低（≈0.1 g·L-1），為了增加HPT溶解度並提高其肝髒靶向性，本研究將HPT製成脂質體並優化了製備工藝，為後期研究奠定基礎。
1 材料
Acquity型超高效液相色譜（美國Waters公司）；JEM-100CX透射電子顯微鏡（日本JEOL公司）；Zetasizer Nano ZS90型激光粒度及電位分析儀（英國Malvern公司）；BS210S電子天平（德國Sartorius公司）。波棱素對照品（自製，純度98.59%）；波棱素結晶（自製，純度>95%）；大豆卵磷脂，蛋黃卵磷脂（德國Lipoid公司）；膽固醇（美國Sigma公司）；0.5 mL超濾離心管（10 kDa）（Millpore公司）；乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純，水為重蒸水。
2 方法與結果
2.1 HPT脂質體包封率的測定
2.1.1 色譜條件 采用UPLC測定樣品HPT的含量，計算脂質體的包封率。色譜條件如下：采用C18 BEH色譜柱（2.1 mm×50 mm，1.7 μm），流動相乙腈-2%冰醋酸（24∶76）[5]，流速0.6 mL·min-1，柱溫30 ℃，檢測波長280 nm，進樣體積5 μL。
2.1.2 線性範圍 精密稱取HPT對照品適量，加入甲醇超聲溶解，定容得到1.00 g·L-1的對照品儲備液。精密量取儲備液適量，分別置於量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，配置得到質量濃度分別為2.0，4.0，10.0，20.0，40.0，100.0 mg·L-1的工作液，采用UPLC分析，測定峰麵積值。將峰麵積（Y）和濃度（X）進行回歸，得到回歸方程Y=10 976X-22 391，r=0.999 9，HPT在2.0～100.0 mg·L-1線性關係良好。
2.1.3 回收率及精密度試驗 精密量取已知含量的樣品溶液9份，分別加入高、中、低3種濃度的HPT對照品溶液，經過測定，平均回收率分別為102%，99.5%，96.8%，日內精密度RSD 2.3%，日間精密度RSD 4.6%。
2.2 超濾法測定包封率
2.2.1 超濾法對空白脂質體的回收率 取空白脂質體溶液適量，經超濾離心後收集濾液，用定磷法測定磷含量。結果未檢測到磷，說明脂質體全部被截留。
2.2.2 超濾法對遊離藥物的回收率 分別取HPT對照品溶液4.0，20.0，80.0 mL經超濾離心後，測定濾液中的HPT含量，計算回收率。結果顯示回收率均大於95%，說明超濾膜對HPT幾乎無吸附作用。
2.2.3 超濾法測定脂質體包封率 量取HPT脂質體溶液0.5 mL，置於Millpore超濾管中，4 000 r·min-1離心10 min後收集濾液，按2.1.1項下方法測定峰麵積，用外標一點法計算HPT含量，記為W1；另精密量取HPT脂質體溶液0.5 mL，加入甲醇超聲10 min後定容，搖勻，同法測定HPT含量，計為W2，根據下列公式計算包封率：包封率（EE）=（1-W1/W2）×100%。
2.3 HPT脂質體製備方法的選擇
以HPT脂質體的穩定性、粒徑大小及包封率為指標，按照相同的處方量，分別按照薄膜分散法、注入法、逆相蒸發法製備脂質體，篩選適宜的製備方法。綜合考慮HPT脂質體的穩定性、粒徑大小及包封率，最終選擇薄膜分散法製備HPT脂質體。
2.4 均勻設計優選HPT脂質體膜材處方