處方以大豆磷脂、膽固醇、HPT 3種成分組成，以三者在其變量範圍內的百分含量作自變量，分別設為X1，X2和X3，以HPT脂質體的包封率為指標，采用帶約束的混料均勻設計，進行處方優化。以預實驗結果為參考，製定如下約束條件：①60%≤X1≤89%，10%≤X2≤20%，1%≤X3≤20%；②X1+X2+X3=100%。采用UD3.0均勻設計軟件，設計U9（93）表進行試驗。
對實驗結果進行分析，得到方程Y=67.2-16.5X1X1+184.96X1X2+506.25X1X3-436.81X2X3-2 784.6X3X3，顯著性水平α=0.05，檢驗值Ft=29.37，臨界值F（5，3）=9.01，回歸方程顯著。根據回歸方程，得出優化實驗處方為：大豆磷脂用量78.05%，膽固醇19.51%，HPT 2.44%。
2.5 HPT脂質體的製備
根據上述篩選條件，采用薄膜分散法製備HPT。按照均勻設計優選的處方比例，稱取HPT 24.4 mg，大豆磷脂780.5 mg和膽固醇195.1 mg，溶於100 mL氯仿中，轉入1 L磨口圓底燒瓶中，30 ℃水浴減壓除去氯仿，使成膜材料在瓶底部形成一均勻類脂膜。然後加入一定濃度的F68溶液50 mL，在50 ℃下旋轉蒸發儀轉動洗膜30 min，將類脂膜洗脫並水合成脂質體初懸液，水浴超聲，過0.22 μm濾膜，即得HPT脂質體。
2.5.1 普流尼克（F68）用量對脂質體包封率的影響 按2.4項下方法製備HPT脂質體，固定其他輔料用量，考察不同F68用量對HPT脂質體包封率的影響。分別選擇F68溶液濃度為0.2%，0.5%，1.0%，2.0%進行試驗。隨著F68溶液濃度增加到0.5%時，HPT脂質體包封率達到穩定，故選用0.5% F68溶液進行水合。
2.5.2 超聲時間對脂質體包封率的影響 按2.4項下方法製備HPT脂質體，考察不同超聲時間對HPT脂質體包封率的影響。分別選擇水浴超聲5，10，20，30 min進行試驗。隨著水浴超聲時間延長，HPT脂質體包封率逐漸增加，水浴超聲20 min後，包封率無顯著增加，故選用水浴超聲20 min。
2.5.3 優化的製備工藝 稱取HPT，大豆磷脂和膽固醇，溶於100 mL氯仿中，轉入1 L磨口圓底燒瓶中，30 ℃水浴減壓除去氯仿，使成膜材料在瓶底部形成一均勻類脂膜。然後加入0.5% F68溶液50 mL，在50 ℃下旋轉蒸發儀轉動洗膜30 min，將類脂膜洗脫並水合成脂質體初懸液，水浴超聲20 min，過0.22 μm濾膜，即得HPT脂質體。3批HPT脂質體的平均包封率為（94.50±2.15）%，平均粒徑為（119.2±10.7）nm，多分散係數為0.156±0.075。
2.5.4 脂質體的形態觀察 取優化工藝條件下製備的HPT脂質體溶液，將稀釋到一定濃度的脂質體溶液滴至專用銅網上，用4%磷鎢酸溶液負染30 s[6]，自然晾幹後，用透射電子顯微鏡觀察粒子的形態。所製備的HPT脂質體為近球狀小囊泡，形態圓整。
3 討論
目前國內對波棱素的研究仍處於起步階段，相關的波棱素製劑研究更是鮮有報道。本研究首次報道了波棱素脂質體製備方法，並係統研究了影響波棱素脂質體包封率的主要因素：①製備方法的選擇較為關鍵，為了得到粒徑較小、包封率高、分散均一的脂質體，篩選結果顯示薄膜分散法能獲得預期的效果；②帶約束的混料均勻設計是常用的處方優化實驗方法，每個因素的貢獻被表示為其在處方中所占配比，並進行邊界約束，所有因素總和為100%，通過試驗求出可以計算和推測最佳混料比[6-7]，從本研究的均勻設計結果可知，HPT用量以及大豆磷脂用量是比較關鍵的，直接影響脂質體的包封率高低，膽固醇用量的影響並不顯著；③在脂質體製備中，脫膜和水合過程中加入0.5% F68水溶液，有利於脂質體的穩定及提高包封率，F68結構中的高分子鏈自由舒展，可在油水界麵與磷脂形成複合凝聚膜，增加界麵膜的柔韌性，同時，其親水性良好的聚氧乙烯鏈可部分吸附在乳滴表麵，產生較大的空間位阻，阻止乳滴的聚合，使脂質體更加穩定[8]。本研究也嚐試過僅加入PBS溶液或者蒸餾水進行脫膜和水合，均不如F68水溶液的效果理想。本研究通過製備波棱素脂質體，大幅地提高了波棱素的溶解性，為後續研究奠定了基礎。今後的研究中將著重考察波棱素脂質體的體內肝靶向性以及藥效作用。
[參考文獻]
[1] 中華人民共和國藥典委員會.中華人民共和國衛生部藥品標準（藏藥）. 第1冊[S].1995：64.
[2] 國家中醫藥管理局中華本草編委會.中華本草.第5冊[M].上海：上海科學技術出版社，1999：542.