2.4 統計學處理
實驗數據用±s表示，結果用SPSS 19.0軟件進行單因素方差分析。
3 結果
3.1 對維甲酸致骨質疏鬆大鼠血清s-TRAP，OPG，Ca和P水平的影響
與空白組比較，模型組大鼠血清s-TRAP水平顯著升高（P酒製品（19分）和鹽製品（19分）>蒸製品（16分）>生品（14分）。
4 討論
4.1 模型與指標分析
維甲酸誘導的大鼠骨質疏鬆模型雖然在病因上與人類骨質疏鬆不同，但在發病症狀、組織形態學表現等方麵與人類有較好的相似性，具有操作簡單、造模周期短、成功率高等優點。維甲酸誘導形成的骨質疏鬆模型的發生機製為激活破骨細胞，促進骨吸收。血清抗酒石酸酸性磷酸酶s-TRAP主要反映破骨細胞的活性和數量，是反映破骨細胞活性和骨吸收狀態的敏感指標[10]，實驗中模型組s-TRAP顯著增加，說明造模成功；狗脊各炮製品均可顯著逆轉這種變化，其與陽性組砂燙骨碎補作用亦接近，但均不及空白組。說明各炮製品對破骨細胞均有一定程度的抑製作用，從而對抗骨的丟失，促進了骨的形成。
中藥狗脊具有祛風濕、抗炎的功效[12-13]，故本研究從炎性因子的靶點作用方向選取了相應檢測指標，以深入探討其作用機製。IL-6表達水平在組織損傷時增高明顯，能通過抑製TNF-α，IL-1含量，來抑製成骨細胞成熟，增加骨吸收，是能夠導致骨量減少的細胞因子[14]，狗脊各炮製品中以砂燙品效果最佳。TNF-α及IL-1均為體內具有抗炎作用等多種功能的細胞因子，二者可促進骨吸收，抑製骨基質膠原合成，狗脊各炮製品中生品對TNF-α影響最為突出，而蒸製品對IL-1水平影響最大。同時TNF-α和IL-1的升高可直接損傷腎血管-基底膜屏障，導致血管通透性增高，促使Ca和P代謝呈負平衡，從而影響骨形成，狗脊各炮製品中鹽製品和砂燙品分別為Ca和P水平的相應最優炮製品。此外，TNF-α尚能抑製OPG（骨保護蛋白，具有對抗骨丟失的作用）的mRNA的表達，可減少破骨細胞前體細胞分化成破骨細胞的數量，IL-1還能直接誘導破骨細胞形成[15]。同時，TNF-α和IL-1也直接參與對OPG的調節[16]，OPG水平方麵酒製品作用最為顯著。
4.2 狗脊各炮製品作用比較分析
本研究經上述分析及實驗結果構建了IL-6→TNF-α和IL-1→Ca和P，OPG的一整條影響骨形成的信號通路，但也隻是從炎性因子角度考慮的一條通路，並不完善，狗脊的不同炮製品對維甲酸致雄鼠骨質疏鬆症的作用效果體現在其中的各個環節，作用強弱不等，若按照s-TRAP水平的影響則各炮製品作用順序為酒製品>砂燙品>蒸製品>生品>鹽製品；若按照作用機製指標總評分則順序為砂燙品>酒製品和鹽製品>蒸製品>生品，可以歸納為酒狗脊和砂燙狗脊效果較好，而蒸狗脊、鹽狗脊以及生狗脊作用次之。前兩者分別為狗脊最早及明代前沿用炮製品和現今應用較為廣泛的品種，而後三者則存在於古今炮製品演變過程中[17]，生品須炮製，炮製後作用增強，至於炮製方法的選擇，本研究結果表明，加熱方式中幹熱的砂燙法優於濕熱的水蒸法，輔料中黃酒優於食鹽。
前期實驗中對狗脊各水煎液樣品進行HPLC-DAD分析，選取254，280，365 nm 3個波長，其中254，365 nm為常用波長，280 nm為狗脊中指標性成分原兒茶酸和原兒茶醛的檢測波長[18]，經實驗結果對比發現254 nm波長下峰的數量較多，且原兒茶酸和原兒茶醛的色譜峰亦有體現，綜合考慮，選取此波長作為狗脊各灌胃樣品的分析波長。結合藥效學實驗結果，發現此圖譜對於綜合評分法匹配較好，對於s-TRAP指標水平並沒有很好地匹配，而s-TRAP這一指標是體現影響破骨細胞活性的整體指標。作者認為此圖譜反應的更多的是小分子酚酸類化合物的信息，此類化合物具有一定的抗炎作用[19-21]；然而影響破骨細胞的通路和環節不單單是炎性因子靶點，水煎液中糖類等組分變化情況並未在圖譜中體現，其亦有可能是通過其他通路途徑影響s-TRAP水平的物質基礎。不難看出，狗脊各炮製品水煎液指紋圖譜還有待深入研究，以更加全麵地反應其藥效和作用機製的物質基礎信息。
[參考文獻]
[1] 徐鋼，鞠成國，於海濤，等.中藥狗脊炮製研究進展[J].中國實驗方劑學雜誌，2012，18（5）：238.
[2] 於海濤，鞠成國，章琦，等. 狗脊生、製品不同提取部位對成骨細胞的影響[J]. 中國實驗方劑學雜誌，2011，17（24）：36.
[3] 於海濤，李慧，章琦，等. 狗脊炮製品中促進成骨細胞增殖分化成分的篩選[J]. 中成藥，2012，34（6）：1139.
[4] 索天驕，韓蕾，賈天柱. 狗脊生、製品正丁醇提取物藥效學實驗研究[J].遼寧中醫藥大學學報，2012，14（10）：35.
[5] 索天驕，韓濤，韓蕾，等. 狗脊生、製品乙酸乙酯提取物抗骨質疏鬆藥效學研究[J].遼寧中醫藥大學學報，2012，14（11）：35.
[6] Nguyen Xuan Cuong，Chau Van Minh，Phan Van Kiem，et a1.Inhibitors of osteoclast formation from rhizomes of Cibotium barometz[J].J Nat Prod，2009，72，1673.
[7] 中華人民共和國藥政管理局.全國中藥炮製規範[M].北京：人民衛生出版社，1988：71.
[8] 中國藥典.一部[S].2010.
[9] 魏偉，吳希美，李元建，等.藥理實驗方法學[M].4版.北京：人民衛生出版社，2010：71.
[10] 季暉，劉悅，盧耀茹. 複方骨益補對維甲酸誘導大鼠骨質疏鬆作用的研究[J].中國天然藥物，2005，3（1）：56.
[11] 任心慈，徐先祥，許杜鵑，等.牛膝總皂苷對維甲酸致骨質疏鬆大鼠骨代謝的影響[J].中國實驗方劑學雜誌，2011，17（4）：128.