固體分散技術和包合技術對白頭翁總皂苷增溶作用研究
製劑與炮製
作者：管詠梅 張妮 陳振華 劉紅寧 朱衛豐 陳麗華 楊明
[摘要] 目的：考察固體分散技術及包合技術對白頭翁總皂苷（白頭翁總皂苷）溶出性能的影響並初步探討其機製。方法：采用熔融法製備白頭翁總皂苷-PEG 4000固體分散體，用冷凍幹燥法製備白頭翁總皂苷-羥丙基-β-環糊精（HP-β-CD）包合物，通過IR，DSC，NMR鑒定固體分散體及包合物性質，並采用小杯法測定了固體分散體及包合物的溶出度。結果：IR，DSC，NMR的結果表明形成了固體分散體及包合物；溶出度大小依次為包合物>固體分散體>原料藥。結論：包合技術能顯著提高白頭翁總皂苷的溶出性能，而固體分散技術對其增溶作用不明顯。
[關鍵詞]白頭翁總皂苷；固體分散體；包合物；溶出度白頭翁總皂苷為中藥白頭翁經提取、分離和純化得到的有效部位，藥理試驗證明其具有抗腫瘤、抗潰瘍等作用[1-2]，具有良好的開發應用前景。該藥物在水中溶解度差[3]，口服生物利用度較低。固體分散技術和環糊精包合技術常用做藥物的增溶方法，用以提高藥物的溶解性能，增加藥物的生物利用度[4]，如茴三硫固體分散體、諾氟沙星-磺丁基醚-β-環糊精包合物等的研究[5-6]，故本研究采用固體分散技術和包合技術改善白頭翁物理性能，以提高白頭翁總皂苷的溶出度，就兩者對白頭翁總皂苷的增溶能力進行了比較，並初步探討其增溶作用的機製。
1材料
Vertex70型傅裏葉紅外光譜分析儀（德國 BRUKER）；Diamond DSC型差示掃描熱分析儀（美國Derkin-Elmer公司）；核磁共振儀（德國 BRUKER）；HJ-6磁力攪拌器（常州國華電器有限公司）；Agilent 1200型高效液相色譜儀（美國安捷倫科技有限公司）；BS 124S型分析天平（德國Sartorius）；FREEZONE 6L冷凍幹燥機（美國Labconco公司）；ZRS-8G型智能溶出試驗儀（天大天發科技有限公司）。
聚乙二醇（PEG） 4000（國藥集團化學試劑有限公司）；白頭翁總皂苷-羥丙基-β-環糊精（HP-β-CD，西安德立生物化工有限公司）；白頭翁總皂苷（中藥固體製劑製造技術國家工程研究中心）；常春藤皂苷元3-O-α-L-吡喃鼠李糖-（1→2）-[β-D-吡喃葡萄糖-（1→4）]-L-吡喃阿拉伯糖苷（B3）對照品（中藥固體製劑製造技術國家工程研究中心）；氘代吡啶（CAS：811-98-3）；甲醇為色譜純；水為自製雙蒸水；其他試劑均為分析純。
2方法
2.1固體分散體和包合物的製備
2.1.1固體分散體的製備[7] 按照熔融法製備固體分散體。精密稱取一定量PEG 4000置於蒸發皿中，80 ℃水浴加熱至完全熔化，然後按白頭翁總皂苷粉末-PEG 4000 1∶2將白頭翁總皂苷粉末加入其中，不斷攪拌，待完全熔融時，取出並立即置於冰水浴中攪拌驟冷，在-20 ℃條件下冷凍2 h後取出，於真空幹燥箱內幹燥，成品研細，粉碎後過5號篩，即得到白頭翁總皂苷-PEG 4000固體分散體。
2.1.2包合物的製備按白頭翁總皂苷粉末白頭翁總皂苷粉末與HP-β-CD 1∶2的比例，取白頭翁總皂苷粉末加無水乙醇，超聲，使其溶解，60 ℃保溫備用。另取HP-β-CD，置於燒杯中，加雙蒸水使溶解，60 ℃、磁力攪拌下逐滴緩慢加入白頭翁總皂苷乙醇溶液，滴畢繼續保溫攪拌1 h，冷卻至室溫，攪拌至剩餘液體約5 mL，冷凍幹燥，得白頭翁總皂苷的HP-β-CD包合物。
2.2固體分散體和包合物的表征
2.2.1固體分散體紅外光譜檢測取白頭翁總皂苷、PEG 4000、物理混合物（白頭翁-PEG=1∶2）、固體分散體適量，用KBr壓片。測試條件為2 mg樣品用800 mg KBr製片，掃描範圍400～4 000 cm-1。
2.2.2包合物紅外光譜檢測取白頭翁總皂苷、HP-β-CD、物理混合物（白頭翁-HP-β-CD 1∶2）、包合物適量，用KBr壓片。測試條件同2.2.1。
2.2.3固體分散體DSC 檢測[8] 分別檢測白頭翁總皂苷、PEG 4000、物理混合物（白頭翁-PEG 1∶2）、固體分散體的DSC曲線。工作條件：空鋁鉗鍋為參比池，另一空鋁鉗鍋為樣品池放入樣品2 mg左右，升溫溫度為10 ℃·min-1，掃描範圍為20～300 ℃，N2流速為 20 mL·min-1。
2.2.4包合物DSC檢測分別檢測白頭翁總皂苷、HP-β-CD、物理混合物（白頭翁-HP-β-CD 1∶2）、包合物的DSC曲線。工作條件同2.2.3。
2.2.5固體分散體NMR檢測分別對白頭翁總皂苷、PEG 4000、固體分散體進行1H-NMR和13C-NMR測定。精密稱取白頭翁總皂苷10 mg，PEG 4000 10 mg，固體分散體30 mg，溶解於氘代吡啶0.6 mL中，進行測試。1H-NMR測試條件：實驗控製溫度24.85 ℃，測試溫度24.85 ℃，頻率300 MHz。13C-NMR測試條件為實驗控製溫度20.05 ℃，測試溫度20.05 ℃，頻率75 MHz。
2.2.6包合物NMR檢測分別對白頭翁總皂苷、HP-β-CD、包合物進行1H-NMR和13C-NMR測定。精密稱取白頭翁總皂苷10 mg，PEG 4000 10 mg，固體分散體30 mg，溶解於氘代吡啶0.6 mL中，進行測試。1H-NMR和13C-NMR測試條件同2.2.5。
2.3固體分散體及包合物的含量和溶出度測定
2.3.1色譜條件 Hypersil ODS2 C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相乙腈-水（39∶61），流速l mL·min-1；柱溫30 ℃；檢測波長203 nm；進樣量20 μL。
2.3.2專屬性試驗分別對白頭翁總皂苷指標成分常春藤皂苷元3-O-α-L-吡喃鼠李糖-（1→2）-[β-D-吡喃葡萄糖-（1→4）]-L-吡喃阿拉伯糖苷對照品、供試品溶液、空白溶劑進行液相檢測，結果得到指標成分出峰位置無溶劑幹擾，峰形和分離度良好。
2.3.3標準曲線的製備精密稱取對照品約20 mg，加入甲醇定容至100 mL，作為儲備液。精密吸取該儲備液0.25，1.0，2.0，4 .0，8.0 mL，分別用甲醇定容至25 mL。按上述色譜條件進樣，記錄。以質量濃度（C）為縱坐標，峰麵積（A）為橫坐標，求得回歸方程A=4.078 6C+9.797 5，r=0.999 7。曲線在2～200 mg·L-1線性良好。
2.3.4精密度試驗取對照品溶液，按上述色譜條件於同天測定3次並連續測定3 d，計算日內精密度和日間精密度，RSD分別為0.13%，0.42%。
2.3.5回收率試驗精密量取已測定含量的溶出樣品1 mL，精密加入等體積濃度相近的對照品溶液，平行3份，按上述色譜條件測定，得到樣品加樣回收率為99.17%，RSD 3.0%。
2.3.6固體分散體中白頭翁總皂苷含量的測定精密稱取固體分散體適量（約15 mg）置50 mL量瓶中，加甲醇，超聲溶解，定容，用0.22 μm微孔濾膜過濾，取續濾液進樣測定，在205 nm處測定吸收度，計算白頭翁總皂苷質量分數為35.97%，RSD 0.65%。
2.3.7包合物中白頭翁總皂苷含量的測定精密稱取包合物適量（約15 mg）置50 mL量瓶中，加甲醇，超聲溶解，定容，用0.22 μm微孔濾膜過濾，取續濾液進樣測定，在205 nm處測定吸光度，計算白頭翁總皂苷質量分數為33.57%，RSD 0.34%。