2.2對照品溶液的製備分別精密稱取肉桂酸、芍藥苷、苦杏仁苷和丹皮酚對照品適量，按照2010年版《中國藥典》桂枝茯苓膠囊項下對照品溶液製備方法，製得各對照品質量濃度分別為0.63，1.11，0.66，1.32 g·L-1。
2.3樣品溶液的製備取桂枝茯苓膠囊10粒，將內容物至研缽中研勻，取細粉約0.25 g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，加入50%甲醇25 mL，密塞，稱定質量，超聲提取30 min，放冷，再稱定質量，補足失重，搖勻，濾過，取續濾液適量，即得。
2.4專屬性試驗分別取缺少桂枝、桃仁、白芍和牡丹皮的陰性製劑，按照2.3項下方法製備陰性樣品。按照上述色譜條件進樣分析，對照品、樣品、陰性樣品的分離譜。從陰性樣品疊加譜圖可以看出，不幹擾目標物的測定，方法專屬性較好。其中，0～10 min為一維色譜分離過程，波長230 nm；10～15 min為二維色譜分離過程，波長218 nm；15～25 min為一維色譜分離過程，波長275 nm；25～35 min為二維色譜分離過程，波長為275 nm。
2.5線性關係考察分別取各對照品溶液2 mL（肉桂酸對照品200 μL）至10 mL量瓶中，加50%甲醇至刻度，作為混合對照溶液1，再分別從對照品溶液1中精密量取5.0，2.5，1.0，0.5，0.25 mL至10 mL量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，製成係列混合對照品溶液。按照2.1項下色譜條件進樣分析，以峰麵積為縱坐標，質量濃度為橫坐標，進行線性回歸，肉桂酸、芍藥苷、苦杏仁苷、丹皮酚分別在0.315～12.6，5.55～222.0，3.3～132，6.6～264 mg·L-1線性關係良好，r分別為0.999 7，0.999 7，0.999 8，0.999 5。
2.6精密度試驗取混合對照品溶液連續進樣5次，結果表明，肉桂酸、芍藥苷、苦杏仁苷和丹皮酚峰麵積的RSD分別為0.33%，0.51%，0.39%，0.64%。
2.7穩定性試驗取待測樣品溶液，分別於配製後0，2，4，6，10，12 h進樣，測定待測成分的峰麵積，結果表明，肉桂酸、芍藥苷、苦杏仁苷和丹皮酚峰麵積的RSD分別為1.4%，0.45%，1.1%，0.46%。
2.8重複性試驗取同一批號的桂枝茯苓膠囊樣品粉末5份，每份0.25 g，精密稱定。按照樣品溶液製備方法製備樣品，按照上述色譜條件進行測定，結果表明，肉桂酸、芍藥苷、苦杏仁苷和丹皮酚含量的RSD分別為0.39%，0.65%，0.68%，0.78%。
2.9加樣回收率試驗取已知含量的樣品6份，每份0.1 g，精密稱定，置錐形瓶中，加入芍藥苷、苦杏仁苷、丹皮酚和肉桂酸對照品溶液適量，按照供試品溶液製備方法製備樣品並測定含量，計算回收率。
2.10含量測定取批號為，，的桂枝茯苓膠囊0.25 g，精密稱定，按照樣品前處理方法製備樣品溶液，分別采用本法與藥典方法測定。
3討論
3.1分析流路構建樣品中芍藥苷與丹皮酚的含量較高，樣品基質成分幹擾較少，利用一維色譜進行分離，而苦杏仁苷與肉桂酸的含量較低，受到基質成分幹擾影響較大，因此采用中心切割的二維分離方法，將2種成分分別切至二維色譜中進行分離。為避免在切換轉移過程中係統壓力的驟然變化對色譜柱造成的影響，試驗中采用定量環儲存樣品。為減少一維溶劑效應的影響，試驗中采用300 μL的定量環，並盡量減小一維色譜柱的柱體積。同時在一維和二維色譜柱的柱後通過1個六通閥實現了檢測器的共用，使方法更具普適性。
3.2色譜條件確定本文為實現一維和二維分離選擇的正交性，在色譜柱選擇上先後嚐試了PFP+C18，PFP+PAⅡC18，C18+PAⅡC18等組合，最終確定C18+PAⅡC18組合（柱選擇性對比函數FS=61[11]）。可獲得良好的峰形和分離度；在流動相選擇上，試驗中曾嚐試在一維和二維分離中的有機相分別采用甲醇和乙腈，但由於苦杏仁苷與肉桂酸的色譜峰在一維分離過程中峰寬較大，切割過程中可能會造成損失，若一維分離的有機相也采用乙腈，則2種成分的峰寬較小，且與二維色譜流動相相溶性較好。在水相選擇上，本文為使芍藥苷和丹皮酚在一維分離過程中獲得良好的峰形和分離度，選擇了0.08%磷酸係統，並加入了0.08%的三乙胺，而二維水相中加入磷酸緩衝鹽，可以減少一維溶劑pH變化對二維分離造成的影響。
3.3含量測定結果比較比較樣品的含量測定結果發現，芍藥苷、丹皮酚的含量基本一致，但苦杏仁苷的含量差異較大（本法較藥典方法低近5%）。本文首先對比了采用藥典方法和本法的樣品譜圖中苦杏仁苷色譜峰的UV光譜均勻性，結果二者基本一致，且光譜均勻性均較好，無法通過UV二極管陣列檢測器來判斷方法的專屬性。因此本文采用二維分離手段，在常規藥典方法基礎上，將苦杏仁苷峰的主體中心切割至第二維色譜柱中進行分離，由於一維和二維色譜柱存在分離選擇性的差異，結果在同樣檢測波長下，在二維分離的譜可見明顯雜質峰（tR=16.953 min），說明常規藥典的分離手段存在基質幹擾。因而造成了最後的含量測定結果偏高。