HPLC—TOF—MS對中藥石見穿化學成分的快速鑒別
化學
作者：周燕妮 趙亮 鄭磊 呂磊
[摘要] 運用高效液相-高分辨飛行時間質譜（HPLC-TOF-MS）技術對中藥石見穿化學成分進行了快速鑒別。色譜分離采用SHISEIDO MG C18（3.0 mm×100 mm，3 μm）色譜柱；流動相為乙腈（A）和水（含0.1%甲酸，B），梯度洗脫，A相比例隨時間的變化：10%～90 %（0～33 min），90%（33～40 min）；柱溫25 ℃；流速0.6 mL·min-1，柱後分流比為2∶1。質譜定性采用飛行時間質譜，電噴霧離子源（ESI），正離子模式，掃描範圍m/z 100～1 000。最後，一次性鑒別出石見穿中28種的化學成分。該研究建立了一種基於HPLC-TOF-MS技術對石見穿中的化學成分進行快速鑒別的方法，為中藥石見穿的質量控製及體內的深入研究奠定了基礎。
[關鍵詞]石見穿；化學成分；鑒別；飛行時間質譜
石見穿為唇形科植物華鼠尾草Salvia chinensis Beth.的幹燥地上部分，廣泛分布於江蘇、安徽、江西、湖北、湖南、廣東、廣西、四川、雲南等地，其性涼，味微苦、辛、平，歸胃、肝、肺經[1]。臨床研究表明[2-3]，石見穿治療肝炎、癌症及婦科疾病療效顯著，這與其所含特有的化學成分相關，石見穿亦為本院抗癌基本方“清肝散結顆粒”的君藥成分，明確石見穿的化學成分對於藥材的質量控製及臨床應用具有重要意義。到目前為止，對石見穿中化學成分分析以傳統的植物化學分離提取的方法居多[4-8]。HPLC與TOF-MS串聯技術對於中藥複雜體係中化學成分分析和鑒定非常有效[9-10]，它可在短時間獲得化合物的準確相對分子質量，通過比對已建立的已知化學成分數據庫對被測成分進行快速分析鑒別，相比於傳統的中藥分離手段具有顯著的優越性。本研究運用HPLC-TOF-MS技術快速鑒別出石見穿中28種化學成分，是國內首次報道的運用高效液相與TOF-MS聯用技術對石見穿中化學成分的定性分析和鑒別。
1材料
1.1儀器 Agilent 1100係列高效液相色譜儀（美國安捷倫公司），配有在線脫氣機，四元泵，自動進樣器，柱溫箱和二極管陣列檢測器；Agilent 6220 高分辨飛行時間質譜儀（美國安捷倫公司），配有標準電噴霧離子源（ESI），分析軟件為MassHunter Data Acquisition在線工作站和Qualiative Analysis離線分析軟件。DJ-04藥材粉碎機（上海澱久公司）；METTLER AE240型1/10萬電子天平（瑞士梅特勒公司）；KUDOS-SK2200H 超聲發生器（上海科導超聲儀器公司）。
1.2藥品與試劑迷迭香酸（批號-），積雪草酸（批號-），齊墩果酸（批號-）和熊果酸（批號-）對照品購自中國食品藥品檢定研究院（純度>99.0%），乙腈和甲酸為色譜純（Fisher，USA），其餘試劑均為分析純，水為純水。3批石見穿藥材分別為產地湖北黃石，購自上海雷允上大藥房，批號；產地安徽亳州，產地收集，批號；產地江西樟樹，產地收集，批號。3批藥材經第二軍醫大學生藥教研室黃寶康副教授鑒定為唇形科植物石見穿S. chinensis的幹燥地上部分。
2方法和結果
2.1對照品溶液的製備精密稱取迷迭香酸，積雪草酸，齊墩果酸和熊果酸對照品5.15，5.21，5.30，5.06 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋定容，配成質量濃度分別為515，521，530，506 mg·L-1的混合母液，精密吸取母液1 mL置於100 mL量瓶，加甲醇定容後，即得對照品混合溶液。
2.2供試品溶液的製備精密稱取石見穿藥材粉末100 g（過40目篩），置3 000 mL圓底燒瓶中，加70%乙醇1 000 mL，加熱回流處理2 h，放置室溫，補足失重，搖勻，經0.22 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得石見穿樣品溶液。
2.3色譜條件 SHISEIDO MG C18色譜柱（3.0 mm×100 mm，3 μm）；流動相為乙腈（A）和水（含0.1%甲酸，B）；梯度洗脫，0～33 min，10%～90%A，33～40 min，90% A；進樣量5 μL；流速0.6 mL·min-1；柱溫25 ℃；柱後分流比為2∶1。
2.4質譜條件采用ESI源，正離子模式，霧化氣為高純氮氣。具體質譜參數：毛細管電壓3 500 V，幹燥氣溫度350 ℃，幹燥氣流速10 L·min-1，霧化氣壓力275 kPa，碎片電壓180 V；參比離子m/z 121.050 8，922.009 7；掃描範圍m/z 100～1 000。測定樣品之前，使用調諧液校準質量軸，以保證質量精度誤差小於1×10-6。