紫皮石斛的質量標準研究
化學
作者：甘小娜 徐英 徐紅 劉家保 楊莉 王崢濤
[摘要] 為建立雲南省龍陵縣紫皮石斛的地方質量標準，采用硫酸-苯酚法測定紫皮石斛中多糖的含量；采用高效液相色譜法測定藥材中甘露糖的含量，並根據2010年版《中國藥典》相關附錄測定浸出物。結果表明紫皮石斛的顯微鑒別特征性強；薄層色譜分離度好，斑點清晰；紫皮石斛含多糖質量分數為35.7%～52.1%（平均42.7%），甘露糖為27.8%～46.1%（平均35.8%），浸出物為4.5%～10.6%（平均7.38%）。所建方法操作簡單，準確可靠，重複性好，製定的標準限度合理，可用於評價雲南省龍陵縣紫皮石斛的質量。
[關鍵詞]紫皮石斛；質量標準；顯微鑒別；薄層鑒別；含量測定
紫皮石斛為雙子葉植物藥蘭科植物齒瓣石斛Dendrobium devonianum Paxt.的幹燥莖，具有益胃生津，滋陰清熱等功效[1]。紫皮石斛莖具節，稍肉質，葉革質，互生，因其莖在秋冬收獲季節除去葉鞘膜後，表麵多為紫色，生長在陽光較強的地方者，紫色更加明顯，因此俗稱紫皮石斛或紫皮蘭[2]。新鮮紫皮石斛的莖稈經修剪、烘幹定型後加工成的螺旋團狀顆粒稱為紫皮楓鬥。石斛的化學成分主要為多糖、生物堿[3]、菲類、聯苄類[4]、酚酸類和黃酮類[5]，另外還含有少量的微量元素[6]以及氨基酸[7]，可用於治療白內障、糖尿病、關節炎、慢性咽炎、腫瘤等疾病。2010年版《中國藥典》收載的石斛主流品種有鐵皮石斛、金釵石斛、鼓槌石斛、流蘇石斛等，其中鐵皮石斛功效冠蓋石斛之首，然其生長條件苛刻、自然繁殖能力低，生長緩慢，價格昂貴。研究表明紫皮石斛富含黏液[8]，化學成分及藥理作用類似鐵皮石斛，主要活性成分多糖的含量也可與鐵皮石斛相媲美[9]，且其價格僅為鐵皮石斛的1/5～1/4，可謂物美價廉。目前雲南省龍陵縣大力發展紫皮石斛種植產業，全縣紫皮石斛種植總量已超過170萬 m2，農業產值突破1.2億元，是我國紫皮石斛的主要產區之一。本研究關於紫皮石斛地方質量標準的建立，包括性狀描述、顯微鑒別，薄層鑒別方法及含量測定方法等，為係統評價紫皮石斛質量提供科學依據。
1材料
Agilent 1260 高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；BA210顯微鏡（Motic公司）；薄層色譜自動點樣器（Linomat-VI，瑞士CAMAG公司）；薄層色譜攝像儀（Reprostar 3，瑞士CAMAG公司）；薄層色譜矽膠板（HSGF254，煙台市芝罘黃務矽膠開發試驗廠）；數控超聲波清洗器（KQ-250DB，昆山市超聲儀器有限公司）；1/1萬電子分析天平（Satorius BSA 124S-CW，北京賽多利斯儀器係統有限公司）；1/10萬電子分析天平（Sartorius BT 25 S，北京賽多利斯儀器係統有限公司）；酶標儀（Bio-Tek Instruments，美國基因有限公司）；烘箱（DHG-9240A，上海精宏實驗設備有限公司）。
HPLC級乙腈（美國Fisher公司）；水為超純水；其他試劑均為分析純；D-（+）-glucose（SIGMA ， Lot 69H00161）；D-（+）-mannose（SIGMA ， Lot 49H10522）；D-（+）-glucosamine（SIGMA ， Lot 101K0133）；紫皮石斛對照藥材（上海中藥標準化研究中心提供，編號zpsh-）；紫皮石斛藥材48批，由上海中醫藥大學楊莉研究員采集並鑒定，憑證標本保存於上海中藥標準化研究中心。
2.1.2紫皮石斛
本品呈圓柱形的段，長短不等，表麵黃色或紫紅色，有深縱槽；葉鞘膜質抱莖，灰白色或紫紅色，偶見黑斑。
2.2鑒別
2.2.1顯微鑒別
本品橫切麵：表皮細胞1列，扁平，類長方形，壁略增厚、微木化，外被黃色角質層，外層常可見無色的薄壁細胞組成的葉鞘，葉鞘維管束有時可見。基本薄壁組織細胞大小相似，類圓形或類多角形，內散布有多數維管束，略排成4～8列。維管束外韌型，外側具纖維束，壁較厚，其外側常鑲嵌有細小的薄壁細胞，細胞中常含矽質塊，維管束內側具纖維束，壁增厚。薄壁細胞常含澱粉粒，有的細胞中含草酸鈣針晶束。
2.2.2薄層色譜鑒別
2.2.2.1供試品溶液的製備取本品粉末約1 g，置100 mL錐形瓶中，加甲醇50 mL、水15 mL超聲提取30 min，濾過，濾液用20 mL石油醚（60～90 ℃）萃取，取石油醚層揮幹，殘渣加氯仿1 mL使溶解，作為供試品溶液。
2.2.2.2薄層色譜條件及結果取對照藥材溶液與供試品溶液各10 μL，分別點於同一矽膠預製薄層板上，以石油醚-丙酮（9∶1）為展開劑，展開，取出，晾幹，噴以10%硫酸乙醇試液，在105 ℃烘約3 min，置紫外燈（366 nm）波長下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應的位置上，顯相同的顏色的熒光斑點。
2.3浸出物
按照2010年版《中國藥典》浸出物測定法（附錄X A醇溶性浸出物測定法），以95%乙醇為溶劑提取、測定。
2.4含量測定
2.4.1多糖的含量測定
2.4.1.1對照品溶液的製備取無水葡萄糖對照品適量，精密稱定，加水製成每1 mL含90 μg的溶液，即得。
2.4.1.2供試品溶液的製備取本品粉末（過3號篩）約0.3 g，精密稱定，加水200 mL，加熱回流2 h，放冷，轉移至250 mL量瓶中，用少量水分次洗滌容器，洗液並入同一量瓶中，加水至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液2 mL，置15 mL離心管中，精密加入無水乙醇10 mL，搖勻，冷藏1 h，取出，4 000 r·min-1離心20 min，棄去上清液（必要時濾過），沉澱加80%乙醇洗滌2次，每次8 mL，離心，棄去上清液，沉澱加熱水溶解，轉移至25 mL量瓶中，放冷，加水至刻度，搖勻，即得。
2.4.1.3線性關係考察精密量取對照品溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 mL，分別置10 mL具塞試管中，各加水補至1.0 mL，精密加入5%苯酚溶液1 mL（臨用配製），搖勻，再精密加硫酸5 mL，搖勻，置沸水浴中加熱20 min，取出，置冰浴中冷卻5 min，以相應試劑為空白，照紫外-可見分光光度法（附錄ⅤA），在488 nm的波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，進行線性回歸，回歸方程為Y=0.059X-0.014，r=0.999 8，多糖在2.54～12.87 mg·L-1線性關係良好。