2.4.1.4精密度試驗精密吸取0.4 mL葡萄糖對照品溶液 6份於具塞試管中，分別按2.4.1.3 中“加水補至1 mL”起操作，在488 nm波長下測定吸光度並計算其含量，RSD為1.1%。
2.4.1.5重複性試驗取同一批號樣品，分別按2.4.1.2中供試品溶液的製備方法操作，在488 nm波長下測定吸光度並計算其含量，重複操作6份。由計算知葡萄糖質量分數42.04%～43.80%，RSD為1.8%，表明方法重複性良好。
2.4.1.6穩定性試驗精密吸取供試品溶液1 mL，按2.4.1.3中“精密加入5%苯酚溶液1 mL”起操作，分別於0.5，1，1.5，2，2.5，3，4，6，8 h依法測定吸光度並計算葡萄糖含量。結果表明樣品在8 h內穩定性良好，RSD為0.40%。
2.4.1.7回收率試驗精密量取樣品溶液0.5 mL，分別精密量取葡萄糖對照品溶液0.1，0.2，0.3 mL，加蒸餾水補至1 mL，按2.4.1.3 “精密加入5%苯酚溶液1 mL”起操作，依法測定吸光度，計算加樣回收率。
2.4.1.8含量測定取紫皮石斛藥材粉末0.3 g，精密稱定，按2.4.1.2項下供試品溶液製備方法製備。吸取供試品溶液1 mL，按2.4.1.3法測定。
2.4.2甘露糖的含量測定
2.4.2.1色譜條件 CAPCELL PAK C18色譜柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm）；柱溫30 ℃；檢測波長250 nm；流動相乙腈-0.02 mol·L-1乙酸銨溶液（18∶82）；流速1.0 mL·min-1；進樣量10 μL。
2.4.2.2校正因子的測定取鹽酸氨基葡萄糖適量，精密稱定，加水製成每1 mL含12 mg的溶液作為內標溶液。另取甘露糖對照品約10 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，精密加入內標溶液1 mL，加水適量使溶解並稀釋至刻度，搖勻，吸取400 μL，加0.5 mol·L-1的PMP（1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮）甲醇溶液與0.3 mol·L-1的氫氧化鈉溶液各400 μL。混勻，70 ℃水浴反應100 min，再加0.3 mol·L-1的鹽酸溶液500 μL，混勻，再用三氯甲烷洗滌3次，每次2 mL，棄去三氯甲烷液，水層離心後，取上清液10 μL，注入液相色譜儀，測定，計算校正因子。
2.4.2.3供試品溶液的製備取本品粉末（過3號篩）約0.12 g，精密稱定，置索氏提取器中，加80%乙醇100 mL，加熱回流提取4 h，棄去乙醇液，藥渣揮幹乙醇，濾紙筒拆開置於燒杯中，加水100 mL，再精密加入內標溶液2 mL，煎煮1 h並時時攪拌，放冷，加水補至100 mL，混勻，離心，取上清液1 mL，置安瓿瓶中，加3.0 mol·L-1的鹽酸溶液0.5 mL，封口，混勻，110 ℃水解1 h，放冷，用3.0 mol·L-1的氫氧化鈉溶液調節pH至中性，吸取400 μL，照校正因子的測定方法，自“加0.5 mol·L-1的PMP甲醇溶液”起，依法操作，即得。
2.4.2.4精密度試驗精密吸取同一對照品溶液10 μL，連續進樣6次，測定甘露糖峰麵積，其RSD為1.9%。
2.4.2.5重複性試驗取同一批號的樣品6 份，按2.4.2.3項下處理並分別測定，結果甘露糖平均含量為36.23%，RSD為2.9%，表明方法重複性良好。
2.4.2.6穩定性試驗取供試品溶液，分別於0，2，4，8，12，24，48 h進樣，每次10 μL，結果甘露糖色譜峰麵積在48 h內基本無變化，RSD為2.3%，表明在本實驗條件下穩定性良好。
2.4.2.7加樣回收率試驗取本品粉末0.06 g，精密稱定，置索氏提取器中，加80%乙醇適量，加熱回流提取4 h，棄去乙醇液，藥渣揮幹乙醇，濾紙筒拆開置於燒杯中，定量加入甘露糖對照品粉末，按測定法項下處理並分別測定。
2.4.2.8含量測定分別精密吸取對照品與供試品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀中，測定其中甘露糖的色譜峰麵積及內標峰麵積，以內標法計算甘露糖含量。
3討論
薄層色譜鑒別實驗中，在製備供試品溶液時，比較了2種方法：①取本品粉末約1 g，置100 mL錐形瓶中，加甲醇50 mL、水15 mL超聲提取30 min，濾過，濾液用20 mL石油醚（60～90 ℃）萃取，取石油醚層揮幹，殘渣加氯仿1 mL使溶解，作為供試品溶液；②取本品粉末約1 g，置100 mL錐形瓶中，加甲醇50 mL超聲提取30 min，濾過，濾液蒸幹，殘渣加水15 mL使溶解，用20 mL石油醚（60～90 ℃）萃取，取石油醚層揮幹，殘渣加氯仿1 mL使溶解，作為供試品溶液。分別將供試品溶液1和2點樣並展開，比較其色譜圖，結果顯示方法1比方法2萃取效率高，故選方法1為供試品溶液的製備方法。參考文獻報道常用的溶劑係統考察展開劑：石油醚-丙酮（7∶3）、石油醚-乙酸乙酯（3∶2）、石油醚-乙酸乙酯（2∶1）為展開劑係統，進行比較並優化，結果顯示，以石油醚-丙酮（9∶1）為展開劑，斑點顯色清晰，Rf較合適，故選該條件為展開劑。此外考察了不同矽膠板、溫度、濕度對薄層鑒別的影響。結果表明，不同品牌的薄層板皆顯色清晰，分離度良好，在保證重複性的前提下，以價格易於接受為原則，推薦使用國產薄層色譜矽膠板；溫度在室溫（20～25 ℃）及低溫（4 ℃）、相對濕度在32%～88%時，均能獲得較好的分離效果。
多糖是紫皮石斛的主要成分[3]，也是其發揮藥效的重要物質基礎[10]，故將其作為含量測定的指標成分。含量測定時，同時檢測48批紫皮石斛藥材與8批鐵皮石斛藥材多糖的含量，結果紫皮石斛多糖的平均含量為42.7%，鐵皮石斛為42.4%，實驗表明，2種石斛多糖含量相當。