淫羊藿女貞子配伍對維甲酸致大鼠骨質疏鬆模型的影響研究
藥理
作者：康學 李嶄 張偉華 周琦 劉仁慧 王秀娟
[摘要] 目的：探討淫羊藿女貞子配伍對維甲酸致大鼠骨質疏鬆模型的影響。方法：3月齡雄性Wistar大鼠60隻，隨機分為正常對照組、模型對照組、淫羊藿組、女貞子組、淫羊藿女貞子配伍組、雷洛昔芬組。維甲酸灌胃2周建立大鼠骨質疏鬆模型，造模同時各給藥組分別灌服相應藥物治療3周。測定血清鈣（Ca）、磷（P）、堿性磷酸酶（AKP）、抗酒石酸酸性磷酸酶（StrACP）含量，並觀察股骨病理形態學變化。結果：模型組較對照組血清Ca，P含量顯著降低，AKP，StrACP活性均顯著升高，股骨頭區骨小梁數目減少，窄小稀疏，斷裂，呈典型的骨質疏鬆樣改變；與模型組比較，各給藥組均可顯著提高血清Ca，P含量，下調血清AKP，StrACP水平，且骨小梁數目增加，變寬，密集交織呈網狀，以配伍組作用最為顯著。結論：淫羊藿女貞子可有效糾正骨代謝異常，改善骨組織病理狀態，從而發揮抗骨質疏鬆作用，其中以二藥配伍應用效果更佳。
[關鍵詞]骨質疏鬆；維甲酸；淫羊藿/女貞子；實驗研究骨質疏鬆症（osteoporosis，OP）是以骨量減少和骨組織纖維結構退化，繼而引起骨骼脆性和骨折危險性增加為特征的係統性骨骼疾病，目前已躍居為世界常見病發病率的第7位，其嚴重性已受到嚴密關注[1]，而中醫藥著重調動內因，整體調節，在防治本病方麵具有較大的優勢。OP屬於中醫“骨痿”、“骨痹”範疇，中醫學認為OP的發生首先當責之於腎虛精虧，多采用補腎填精壯骨之法[2]。藥對淫羊藿女貞子是名老中醫徐輝光教授積30餘年臨床之經驗而精選創製，臨床4∶3配伍作為支氣管患者緩解期用藥，課題組前期研究結果證實[3]，平補腎中陰陽立法之淫羊藿女貞子配伍對大鼠哮喘模型激素幹預治療導致的骨代謝異常有良好的保護作用，提示二者配伍可能具有拮抗OP的作用。大量研究已證實單味淫羊藿及淫羊藿和/或女貞子相關複方在防治OP方麵的顯著效果[4-5]，但尚未見二藥配伍防治OP的報道。本實驗通過比較研究淫羊藿、女貞子單用及配伍對維甲酸致大鼠骨質疏鬆模型的影響，探討二藥配伍對骨代謝異常及骨組織病理狀態的改善作用，為防治OP的進一步研究提供實驗依據。
1材料
1.1動物清潔級健康雄性Wistar大鼠60隻，3月齡，體重（250±20） g，由北京維通利華實驗動物技術股份有限公司提供，合格證號SCXK（京）2012-0001。
1.2試劑與藥品維甲酸（北京貝麗萊斯生物化學有限公司，批號）；羧甲基纖維素鈉300～800 mPa·S（CP）（國藥集團化學試劑有限公司，批號F）；中藥材製淫羊藿（批號）、酒女貞子（批號）均購於北京同仁堂藥店；鹽酸雷洛昔芬片（易維特）：規格為每片重0.258 5 g，相當於以C28H27NO4S·HCl計60 mg（禮來蘇州製藥有限公司，批號L02576）；氨基甲酸乙酯（烏拉坦）（天津市光複精細化工研究所，批號）；AKP，StrACP，Ca，P測定試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號分別為，，，）。
1.3儀器 UV-1700紫外分光光度計（日本島津公司）；Biofuge 15R低溫生物離心機（Heraeus SEPATECH公司）；CP224C電子分析天平[0.000 1 g，奧豪斯儀器（上海）有限公司製造]；NIS-Elements BR 3.2圖像分析軟件；尼康（Nikon）ECLIPSE 80i 生物顯微鏡（北京銳馳恒業儀器科技有限公司）；萊卡2016型切片機（上海萊卡儀器有限公司）。
2方法
2.1分組按隨機數字表法分為6組，即正常對照組、模型對照組、淫羊藿組、女貞子組、淫羊藿女貞子配伍組（簡稱配伍組）、雷洛昔芬組（陽性對照組），每組10隻。自由飲水、攝食。
2.2造模及給藥除對照組外，其餘各組大鼠用0.5%羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）配成的維甲酸混懸液按70 mg·kg-1灌胃，對照組大鼠以0.5%CMC-Na灌胃，連續造模2周。在造模的同時，各組動物灌胃給予相應的藥物或生理鹽水，共計3周。①淫羊藿組：淫羊藿煎劑9.5 g·kg-1體重灌胃，每日1次；②女貞子組：女貞子煎劑9.5 g·kg-1體重灌胃，每日1次；③淫羊藿女貞子組：淫羊藿女貞子（4∶3）煎劑9.5 g·kg-1體重灌胃，每日1次；④雷洛昔芬組：雷洛昔芬片6.25 mg·kg-1體重灌胃，每日1次；⑤對照組、模型組：灌服與用藥組等體積的生理鹽水。
2.3取材及檢測大鼠禁食16 h後麻醉，腹主動脈取血，離心取血清，用於血清AKP，StrACP，Ca，P的檢測，按照試劑盒說明書，均采用比色法檢測。完整分離大鼠的左側股骨，剔除所有附著的肌肉和結締組織，以10%甲醛溶液固定，HE染色後行病理學檢查。
2.4統計學方法數據采用±s表示，組間比較采用方差齊性檢驗及單因素方差分析，根據方差齊性檢驗結果選擇LSD（方差齊）或Tamhane′s T2（方差不齊），采用SPSS 18.0軟件包完成。
3結果
3.1各組大鼠體重的比較實驗開始時各組體重均無差異；實驗結束時，模型組大鼠體重較對照組顯著下降（P[2]，雖取得了一定療效，但多需聯合使用，加之治療費用高，不良反應多及潛在的致癌性等弊端，使其臨床應用受到限製，治療現狀並不理想。與西藥相比，中醫藥在OP的防治過程中著重調動內因，辨證論治，整體調節。OP屬於中醫“骨痿”“骨痹”範疇，從中醫角度而言，腎藏精主骨生髓，腎精充實則骨髓生化有源，骨得其養則堅固有力；若腎精虧虛則骨髓化生乏源，骨失其養則會出現骨骼脆弱，腰膝酸軟等。故腎虛精虧是本病的病機關鍵，從腎論治是中醫治療本病的基本原則。中藥淫羊藿溫腎壯陽、堅筋骨，女貞子滋補肝腎陰精，二藥配伍應用平補腎中陰陽，更切合OP的中醫發病機製。此外，OP屬於慢性複雜性病證，須長期服藥，補陽藥淫羊藿性質溫燥不宜長期臨床應用，若能配伍補益腎中陰精的女貞子以陰中求陽，則可達到《景嶽全書·新方八略》中言：“此陰陽相濟之妙用也。”故本實驗通過單味藥與藥對配伍的作用比較，評價平補腎中陰陽之藥對淫羊藿女貞子對維甲酸致大鼠骨質疏鬆模型的防治作用。