2.6免疫組化檢測COX-2和VEGF蛋白表達（SP法）上述石蠟切片按試劑盒說明書進行免疫組化染色，中性樹膠封片、攝片並分析。結果判定：以積分吸光度（IA，IA=陽性麵積×平均吸光度）表示COX-2和VEGF蛋白表達量，每張切片於10×40倍光鏡下隨機分析5個視野，取其均值代表該樣本蛋白表達量。圖像分析係統為Image-pro plus 6.0。
2.7統計分析采用SPSS 11.5軟件進行統計學分析。數據采用±s表示，多組間均數比較采用單因素方差分析（One-way ANOVA），2組間均數比較采用q檢驗，顯著性差異標準為α=0.05。
3結果
3.1槐定堿對大鼠機械性痛閾的影響各組動物在造模後第14天開始出現明顯機械性痛覺超敏反應，機械刺激痛閾值顯著下降（P[7]。作者采用W256癌細胞注入大鼠骨髓腔成功製備了骨癌痛模型[8]，以該模型替代普通疼痛模型進行抗癌痛藥物的相關研究，更加切合臨床病症實際，提升了研究結果的實用性和科學性。
研究表明，乳腺癌組織中高表達環氧酶-2（COX-2）， COX-2的過度表達可以促進乳腺導管內原位癌發展成為侵襲性乳腺癌[9]。COX-2是前列腺素E2 （PGE2）合成的誘導酶， PGE2是參與炎症反應的重要介質，可促進炎症反應和組織受損[10]。腫瘤組織高表達COX-2可使病理性PGE2合成大量增加，促進了炎症反應和組織損傷。且PGE2可與傷害性感受器相應受體結合，參與癌症痛痛覺過敏的形成[11]。因此，COX-2在乳腺癌發生發展和癌痛形成過程中起重要作用。王氏等[12]采用選擇性COX-2抑製劑塞來昔布治療MRMT-1乳腺癌細胞誘導的骨癌痛大鼠，取得了良好效果，研究結果表明塞來昔布對該骨癌痛模型具有鎮痛和抗腫瘤作用，能減輕骨質破壞程度，誘導腫瘤細胞凋亡、壞死。近年來的研究結果表明，血管內皮生長因子（VEGF）是一種與實體瘤生長和轉移最為密切的血管形成調節因子，且和COX-2有共表達的現象[13]。乳腺癌組織中COX-2的高表達可上調VEGF水平，促進新生血管形成，抑製癌細胞凋亡，促進癌細胞增殖，從而促進腫瘤的發生和發展[14]。
本研究結果顯示，槐定堿治療組較模型組大鼠機械性痛閾和熱痛閾值顯著提高（P-1） for 10 days. The mechanical withdrawal threshold and the thermal withdrawal latency of each group were measured before and after the treatment. After the last treatment， the radiological and histopathological observation shall be conducted for sick legs of all rats. The expressions of cyclooxygenase-2 （COX-2） and vascular endothelial growth factor （VEGF） in tumor tissues were detected by mmunohistochemistry. Result： Sophoridine could significantly increase the mechanical withdrawal threshold and the thermal withdrawal latency （P
[Key words] sophoridine； W256 tumor cell； bone cancer pain； cyclooxygenase-2； vascular endothelial growth factor
doi：10.4268/cjcmm