Fas,FasL及內參GAPDH分別在2個管中同時進行反應,除探針和引物外,2管中加入的RNA模板和其他反應試劑均一致。通過ABI 7500定量PCR儀器取其循環閾值均值(Ct值),描述各組基因的擴增曲線和溶解曲線。結果采用相對定量分析法[7]:2-ΔΔCt法進行計算mRNA相對表達量,以各組ΔCt值進行統計學分析,同時本實驗以模型組做為未處理組,與其他各組進行對照比較。
ΔCt=實驗組目的基因Ct值-該組內參基因Ct值,ΔΔCt=實驗組(目的基因Ct-內參基因Ct)-模型組(目的基因Ct-內參基因Ct),ΔCt值越小表示Fas,FasL mRNA在頜下腺組織中的表達越高,而2-ΔΔCt值越高,表明樣本中Fas,FasL mRNA相對於模型組表達量越大。
本實驗結果顯示,所有樣本中Fas,FasL mRNA顯示呈指數增長,並達到平台期,擴增效率較高。熒光定量Fas及FasL mRNA PCR產物的熔解曲線表現為單一的峰值,表明擴增產物單一,避免了檢測過程中假陽性結果。
2.5統計學分析實驗數據用SPSS 15.0軟件進行統計分析。計量資料采用±s表達,組間比較采用One-Way ANOVA 檢驗方法,結果以P[8]。研究顯示[9]pSS患者唇腺腺泡上皮細胞(AEC)和導管上皮細胞(DEC)細胞凋亡率及Fas/FasL蛋白表達較正常人顯著升高,且二者呈正相關,提示唇腺組織細胞凋亡可能是Fas/FasL途徑介導的。Saegusa[10]發現在原發性幹燥綜合征動物模型中,唾液腺組織CD4(+)T細胞浸潤,出現很大比率Fas配體,唾液腺導管上皮細胞不斷的產生Fas。均提示Fas/FasL途徑介導的細胞凋亡可能是pSS唇腺組織功能失調的原因之一。
目前SS治療方法主要是采取措施改善症狀,控製和延緩病情進展,根據病情進行局部治療或係統治療,而中醫藥配合西藥在治療SS方麵有一定的優勢,取得了較好臨床療效。在長期的臨床觀察中發現,SS患者辯證以氣陰兩虛兼有血瘀為多見,故運用養陰、益氣、活血的方法治療SS與之相應。中藥養陰益氣活血方具有滋腎養陰、益氣生津、活血化瘀之功,有效針對陰虛氣虛兼血瘀病機,達到治療SS之目的。臨床運用中西醫結合治療後,患者臨床症狀明顯緩解,同時改善SS患者機體的細胞免疫、體液免疫以及炎症過程,減輕自身免疫性炎症,有效緩解SS的病情[3]。通過臨床研究發現,本方藥還能改善SS患者生活質量和整體狀況[4]。故有必要更深入研究其具體作用機製。
本研究結果顯示,模型組小鼠頜下腺組織Fas以及FasL蛋白表達均高於其他各組,提示SS頜下腺組織存在Fas及FasL的高表達,促進細胞凋亡,導致淋巴細胞浸潤而使頜下腺受損而發病,說明細胞凋亡在SS發病中有一定的作用。正常組FasL表達明顯低於羥氯喹組;而與中藥組、中西藥組相比無顯著性差異。表明中藥養陰益氣活血方藥能降低幹燥綜合征NOD小鼠頜下腺組織Fas,FasL蛋白表達。模型組小鼠頜下腺組織FasL mRNA表達均高於對照組、中藥組、中西藥組;中西藥組表達明顯低於羥氯喹組。提示中藥養陰益氣活血煎劑和羥氯喹均能夠降低NOD小鼠頜下腺組織Fas,FasL mRNA的表達,中藥與羥氯喹合用效果更好。說明中藥養陰益氣活血煎劑可能通過下調幹燥綜合征NOD小鼠頜下腺組織Fas,FasL及其mRNA表達來調節細胞凋亡,從而改善頜下腺組織的損害,達到有效治療。
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