2.4.2轉運試驗用HBSS溶液配製質量濃度為5， 10， 15 μg·L-1的咖啡酸溶液，經過慮除菌，用空白HBSS溶液衝洗Transwell板3遍，放培養箱中培養30 min。對於從apical（腸腔側，AP側）到basolateral （基底側，BL側）轉運：將藥物溶液0.5 mL 加到AP側作為供給池，同時BL側加入1.5 mL空白HBSS溶液作為接收池；對於從BL側到AP側轉運：將藥物溶液1.5 mL 加到AP側作為供給池，同時BL側加入0.5 mL空白HBSS溶液作為接收池。將Transwell板置於37 ℃振搖孵育，與給藥後120 min吸取100 μL 接收液，每組實驗平行3份，結果以±s表示。表觀滲透係數（Papp）及外排率的計算公式如下。
3結果
3.1分析方法驗證
在本試驗條件下，咖啡酸和肉桂酸的檢測靈敏度高，分離度良好，R>1.5，二者典型的LC-MS/MS色譜。分別用空白血漿、灌流液、HBSS溶液配製咖啡酸的2個係列的對照品溶液，以待測物質量濃度（X）為橫坐標，待測物與內標的峰麵積比值（Y）為縱坐標，求得回歸方程。分別采用空白血漿、灌流液、HBSS溶液配製低、中、高3種質量濃度咖啡酸對照品，對分析方法的精密度、準確度、回收率及穩定進行考察，結果均符合生物樣品分析要求。
3.2咖啡酸大鼠體內的藥動學考察
大鼠股靜脈注射、灌胃給藥後，HPLC-MS/MS測定其血漿咖啡酸的濃度變化，得平均血藥濃度-時間曲線。采用3P97軟件處理血藥濃度值，用房室模型和統計矩法計算藥動學參數。Cmax，tmax以實測值計算，AUC按梯形麵積計算，時間範圍取0～∞ h。
3.3大鼠原位腸血管灌流模型考察咖啡酸的腸吸收率
大鼠十二指腸給藥5 min後，灌流液中咖啡酸的質量濃度為（255.0±58.89）μg·L-1，給藥60 min 後，灌流液中的藥物的質量濃度為（1 179.0±118.2）μg·L-1，隨後，灌流液中的藥物濃度變化趨勢平緩直至到實驗結束。大鼠原位腸血管灌流模型測定咖啡酸的腸吸收率為12.4%。
3.4咖啡酸在Caco-2細胞模型的雙向轉運
不同濃度的咖啡酸HBSS溶液在Caco-2細胞模型的雙向轉運的結果。由結果可知隨著濃度逐漸增大，雙向轉運的表觀滲透係數幾乎保持不變，咖啡酸10，15 μg·L-1的PappA→B，PappB→A與咖啡酸的質量濃度5 μg·L-1的表觀滲透係數沒有顯著性差異。雙向轉運的結果顯示，在考察的濃度範圍內PappA→B>PappB→A，推測咖啡酸可能是P-gp的底物。
4討論
咖啡酸是苯丙素類化合物中的簡單苯丙素類天然化合物。苯丙素類化合物在自然界中分布非常廣泛，包括簡單苯丙素、香豆素、木脂素、木質素、黃酮類等天然芳香族化合物。苯丙素類化合物是一類具有生物活性的化學成分。藥物的結構在一定程度上影響著其在體內的吸收特性。遊離香豆素、黃酮類化合物脂溶性較大，易於吸收，主要通過被動擴散方式透過生物膜[8]。陳炳鑾[9]驗證了9種黃酮類化合物在Caco-2細胞模型上的吸收均以被動擴散。苷類化合物因極性大，不易被直接吸收，黃酮苷類則經載體或水解成苷元後吸收[10]。簡單苯丙素類以咖啡酸、桂皮酸、對羥基桂皮酸、阿魏酸等為常見。阿魏酸的脂溶性較咖啡酸大，有研究[11]發現阿魏酸在Caco-2細胞模型中具有良好的轉運，大鼠體內絕對生物利用度達64.91%。咖啡酸極性大，灌胃後絕對生物利用度低，為14.7%。為了更進一步地探討咖啡酸生物利用度的緣故，本實驗設計了原位腸血管灌流法研究咖啡酸的腸吸收率及在Caco-2細胞模型的基礎上考察咖啡的通透性。1985年，Pang等[12]首次提出腸肝血管灌流模型並將其用於研究依那普利的腸吸收率。王素軍等[13]對腸肝血管灌流模型的灌流液成分進行優化。原位腸血管灌流模型的優點是可以根據實驗研究目的的需要，改變實驗的影響因素，考察各種因素對實驗結果的直接影響，且該模型可以更直接地了解藥物具體的腸吸收率。咖啡酸的腸吸收率較低，12.4%。該數值與傳統的動物體內實驗獲得的絕對生物利用度14.7%相近，更進一步地驗證了原位腸血管灌流模型的實用性、可靠性。當藥物正向轉運的Papp-6 cm·s-1，視為吸收差，吸收率為0～20%；Papp在（1～10）×10-6 cm·s-1，則為吸收中等，吸收率介於20%～70%；若Papp>10×10-6 cm·s-1，則認為吸收良好，吸收為70%～100%[14]。咖啡酸是在Caco-2細胞模型的通透性差，為吸收差的藥物，其在實驗研究的濃度範圍內，外排率皆大於2，推測咖啡酸可能為P-gp的底物，且在Caco-2細胞模型中的轉運途徑可能以主動轉運。
[參考文獻]
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