刺五加注射液中3個主要活性成分與相應單體在大鼠體內的藥動學比較
藥代動力學
作者：範惠霞 鄧誌鵬 仲浩 徐曉婷 姚慶強
[收稿日期] 2013-12-09
[通信作者] *姚慶強，博士，碩士生導師，Tel：（0531）82919960，E-mail
[作者簡介] 範惠霞，碩士研究生，， E-mail：
[摘要] 研究刺五加注射液中3個活性成分，紫丁香苷、刺五加苷E及異嗪皮啶在大鼠體內的藥動學行為，並與相應單體分別經靜脈注射給藥後大鼠體內藥動學行為比較。將24隻雄性大鼠隨機分為4組，分別經靜脈注射給予紫丁香苷、刺五加苷E、異嗪皮啶及相當劑量的刺五加注射液。采用液相色譜-串聯四級杆質譜（liquid chromatography tandem mass spectrometry， LC-MS/MS）法測定不同時間點血漿中紫丁香苷、刺五加苷E及異嗪皮啶的濃度並采用DAS 2.0 數據處理軟件及SPSS 17.0 統計軟件分別進行藥動學參數計算及比較。靜脈給藥後，3種單體成分與刺五加注射液主要藥動學參數如血藥濃度-時間曲線下麵積（AUC）、血漿清除率（CL）、消除半衰期（t1/2）等存在顯著性差異（P[1-3]。藥理實驗表明，單體紫丁香苷、刺五加苷E及異嗪皮啶分別具有調節免疫功能 [4-5]， 保護心肌[6]，保護神經係統[7-8]，抗腫瘤[4]以及抗氧化[9]等作用。
目前國內外對刺五加注射液中紫丁香苷、刺五加苷E的藥代動力學研究已有報道[11]，而對刺五加注射液中異嗪皮啶在大鼠體內的藥代動力學研究未見報道。本實驗通過液相色譜質譜聯用技術，考察靜脈給予刺五加注射液後紫丁香苷、刺五加苷E及異嗪皮啶在大鼠體內藥代動力學行為，與分別靜脈給予3個單體藥物後的藥代動力學行為進行比較，初步探索刺五加注射液中共存成分對3個有效成分藥動學行為的影響，為臨床合理用藥提供依據。
1 材料
1.1 儀器
Agilent1200高效液相色譜儀購自美國Agilent公司，包括G1322A 在線脫氣機、G1312B二元泵、G1367D自動進樣器、G1316B DAD檢測器等模塊；Agilent6410三重四級杆串聯質譜儀購自美國Agilent公司，配備電噴霧（ESI）離子源；TGL-16G高速台式離心機，購自常州澳華儀器有限公司；SK-1快速混勻器渦流混懸儀，購自常州澳華儀器有限公司。
1.2 試藥及試劑
紫丁香苷、刺五加苷E、異嗪皮啶、牡荊苷（內標物質）均購於沈陽瀧浦科技有限公司，純度均>98%，批號分別為LPZ022，LPC031，LPQ069，LPM041。刺五加注射液購自黑龍江烏蘇裏江製藥有限公司，批號20120112，規格250 mL/支。經本研究室采用高效液相色譜法測定，質量濃度分別為紫丁香苷139.9 mg·L-1 ， 刺五加苷E 126.6 mg·L-1 ， 異嗪皮啶13.6 mg·L-1。氯化鈉注射液購自辰欣藥業股份有限公司，批號1206085121。色譜級甲醇和乙腈分別購自美國TEDIA公司和美國Burdick & Jackson公司，其他試劑均為分析純；水為娃哈哈純淨水。新鮮大鼠空白血漿由本實驗製備。
1.3 動物
雄性健康Sprague-Dawley大鼠購自山東中醫藥大學實驗動物中心，合格證號SCXK（魯）2011-0003。於本室動物房飼養7 d，飼養溫度為20～25 ℃，飼養環境濕度為40%～70%，體重為（231±14） g。
2 方法與結果
2.1 測定條件
2.1.1 色譜條件 采用Diamonsil C18色譜柱（4.6 mm × 150 mm， 5 μm）；流動相為甲醇（A相）-0.1%甲酸溶液（B相），進行梯度洗脫（0～4.0 min，20%～70% A； 4.0～12.0 min，70% A）；流速為0.6 mL·min-1；進樣量為20 μL。
2.1.2 質譜條件 采用電噴霧離子源，多反應監測模式，進行正負離子同時監測；毛細管電壓，（±）4.0 kV；幹燥氣流速10 L·min-1；幹燥氣溫度325 ℃；霧化氣壓力241.325 kPa；高純氮氣為碰撞氣，壓力為0.15 MPa。多反應監測模式各化合物設置。
2.2 溶液配製
2.2.1 標準溶液血漿樣品的製備 精密稱取紫丁香苷對照品、刺五加苷E 對照品、異嗪皮啶對照品適量至量瓶中，加甲醇溶解製成質量濃度分別為980，69.0，1 190 mg·L-1的對照品儲備液，搖勻後置冰箱4 ℃冷藏保存。精密取不同體積各對照品儲備液混合，並逐級稀釋，得紫丁香苷、刺五加苷E 質量濃度為30.0，100.0，300.0，1 000，3 000，10 000，30 000 μg·L-1，異嗪皮啶質量濃度為10.0，30.0，100.0，300.0，1 000，3 000，10 000 μg·L-1的7個係列濃度的混合對照品溶液。取混合對照品溶液20 μL，加入180 μL大鼠空白血漿，得紫丁香苷、刺五加苷E質量濃度為3.00，10.0，30.0，100.0，300.0，1 000，3 000 μg·L-1；異嗪皮啶質量濃度為1.00，3.00，10.0，30.0，100.0，300.0，1 000 μg·L-1的對照溶液血漿樣品。
2.2.2 質量控製血漿樣品的製備 精密量取不同濃度的對照品儲備液混合，用乙腈逐級稀釋，得低、中、高濃度的質控樣品溶液，其中紫丁香苷、刺五加苷E質量濃度為100.0，1 000，27 000 μg·L-1，異嗪皮啶質量濃度為30.0，300.0，9 000 μg·L-1。取混合對照品溶液20 μL，加入180 μL大鼠空白血漿，得紫丁香苷、刺五加苷E質量濃度為10.0，100.0，2 700 μg·L-1，異嗪皮啶質量濃度為3.00，300.0，900 μg·L-1質控血漿樣品。
2.2.3 內標溶液的配製 取牡荊苷適量置於量瓶中，用乙腈溶解製成質量濃度為100 mg·L-1內標儲備溶液。取內標儲備液適量用乙腈稀釋100倍，得質量濃度為1 000 μg·L-1的內標溶液。
2.3 血漿樣品製備
50 μL血漿樣品中依次加入50 μL內標溶液，50 μL乙腈作為沉澱試劑，渦流混合1 min，於12 000 r·min-1條件下離心5 min，取上清液進行測定。
2.4 方法專屬性
取空白血漿、空白血漿加入被測物及內標物質，以及大鼠給予注射液後的血漿樣品各50 μL，按血漿樣品處理方法處理並測定。結果顯示，在空白大鼠血漿中無雜質峰幹擾，3個目標化合物及內標化合物的峰形良好，基線穩定。表明該方法的專屬性良好。