CRP和TNF—α在慢阻肺急性加重期病情嚴重程度判斷中的意義
論著
作者：梁衛娟等
[摘要] 目的 探討CRP和TNF-α在慢阻肺急性加重期病情嚴重程度判斷中的意義。 方法 選擇慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者46例，其中21例患者合並呼吸衰竭，為呼吸衰竭組，25例患者不合並呼吸衰竭，為無呼吸衰竭組，另選擇健康誌願者30例為對照組，檢測各組CRP、TNF-α水平。 結果 治療前AECOPD患者血清CRP水平和TNF-α水平均顯著高於治療後和對照組（P
0.05）。合並呼吸衰竭患者血清CRP水平和TNF-α水平均顯著高於未合並呼吸衰竭患者（P [關鍵詞] C反應蛋白；腫瘤壞死因子α；慢性阻塞性肺疾病 [中圖分類號] R563 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701（2015）09-0012-04 Significance of CRP and TNF-α in judgment of severity of AECOPD LIANG Weijuan1 HUA Feng2 1.Medical College of Ningbo University，Ningbo 315100，China；2.Breath Internal Medicine Department， the Central Hospital of Huzhou City in Zhejiang Province， Huzhou 313000，China [Abstract] Objective To discuss significance of CRP and TNF-α in judgment of severity of AECOPD. Methods Selected 46 cases with AECOPD， 21 cases with respiratory failure was respiratory failure group， 25 cases without respiratory failure was non-respiratory failure group. Thirty healthy volunteers were selected as control group. Serum CRP and TNF-α were detected. Results Pretreatment serum CRP levels and TNF-α levels in patients with AECOPD were significantly higher than after treatment and the control group（P0.05）. Serum CRP and TNF-α levels in patients with respiratory failure were significantly higher than those in patients without respiratory failure（P [Key words] CRP； TNF-α； COPD 慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease，COPD）是呼吸內科的常見疾病，COPD的病死率較高，其發病機製與氣道以及肺實質、肺血管發生慢性炎症有關[1]。在肺組織中有炎性細胞浸潤，而炎性細胞通過釋放多種炎性因子而加重患者的病情。TNF-α是一種細胞因子，其可能參與了慢阻肺氣道炎症的發生[2]。CRP 是一種急性時相蛋白，在機體發生炎症反應時會顯著升高[3]。慢阻肺急性加重多於感染有關，因此CRP可以作為COPD急性加重期（AECOPD）的診斷指標之一。本研究檢驗46例COPD急性加重期患者的CRP以及THF-α水平，並與健康對照組進行比較，從而分析CRP和TNF-α在患者病情嚴重程度判斷方麵的臨床意義。現報道如下。 1 資料與方法 1.1 一般資料 選擇 2011年3～8 月在我院住院治療的慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者46 例為研究對象。其中男28例，女 18 例。年齡 48～76 歲，平均（59.1±7.6）歲。所有患者均符合慢性阻塞性肺疾病的診斷標準。排除入院前1個月使用激素的患者、合並有導致CRP、TNF-α升高的疾病等。另選擇30 例健康誌願者為對照組，其中男17 例，女 13 例。年齡 55～75歲，平均（58.3±8.4）歲，排除合並心、肝、腎、腦等重要髒器氣質性病變的患者以及合並糖尿病的患者。慢性阻塞性肺疾病的患者根據是否合並呼吸衰竭分為呼吸衰竭組25例，無呼吸衰竭組21例。根據是否合並肺心病分為肺心病組18例和無肺心病組28例。所有患者入院後均接受抗感染、止咳、吸氧以及對症支持治療。 1.2檢測項目及方法 1.2.1試劑及儀器 試劑：TNF-α ELISA試劑盒，CRP ELISA 試劑盒，均由提供康泰生物科技（北京）有限公司提供。儀器：離心機（無錫市龍泰化工機械設備有限公司），水浴箱（北京百萬電子科技中心），酶標儀（北京普天），心電圖儀（上海天呈科技有限公司），血氣分析儀（西門子），血常規分析儀（西門子）。 1.2.2 檢測方法 入院後次日晨起抽取肘靜脈血5 mL，離心後置-80℃冰箱備用。治療10 d後患者一般症狀體征明顯減輕後，抽取空腹靜脈血5 mL，離心後-80℃冰箱備用。血常規：采用全自動血常規分析儀檢測治療前和治療後白細胞計數以及中性粒細胞百分比。正常白細胞範圍：（4～10）×109/L，>10×109/L為陽性，中性粒細胞百分比（N）>70%為陽性。CRP：去出試劑盒，平衡至室溫後加樣，空白孔加 100 μL樣品稀釋溶液，標準孔加標準品，待測樣品孔加待測樣品，均為100 μL。37℃下溫育 120 min。棄去液體，甩幹，各孔加標準液 A工作液100 μL，37℃下溫育60 min。棄去液體，甩幹，洗板，共 3 次。各孔加待測液B工作液100 μL，加上蓋，37℃下溫育 60 min。棄去液體，甩幹，洗板，共 5 次，方法同步驟 4。各孔加底物液 90 μL，37℃下暗處反應15～30 min。各孔加終止液50 μL。用酶標儀在450 nm處測光密度（OD 值）。陰性：CRP（0～6）mg/L，陽性：>6 mg/L。TNF-α：取出試劑盒，平衡至室溫。配製標準品液，配製洗滌液，建立標準曲線，加樣，每孔加待測樣品 100 μL，充分混勻，37℃下反應120 min。洗板4～6次，各孔加50 μL生物素第一抗體工作液，充分混勻，37℃下反應60 min，洗板 4～6 次。各孔加100 μL酶標抗體工作液。將37℃下反應60 min，洗板。各孔加100 μL底物液，37℃下暗處反應 5～10 min。各孔加終止液50 μL。20 min內在450 nm處測OD值。根據OD 值在曲線圖上查出對應的 TNF-α含量。 1.3統計學方法 采用SPSS12.0統計學軟件對數據進行分析，計數資料采用χ2檢驗，計量資料以均數±標準差表示，采用t檢驗或者F檢驗。P 2 結果 2.1 COPD患者治療前後以及對照組血清CRP、TNF-α水平 治療前AECOPD患者血清CRP水平和TNF-α水平均顯著高於治療後和對照組（P0.05）。 2.2 合並呼吸衰竭患者與無呼吸衰竭患者血清CRP、TNF-α水平 合並呼吸衰竭的患者血清CRP水平和TNF-α水平均顯著高於未合並呼吸衰竭患者（P 2.3合並肺心病患者與未合並肺心病患者血清CRP、TNF-α水平 合並肺心病組患者TNF-α水平顯著高於未合並肺心病組患者（P 2.4 AECOPD患者血清WBC陽性率與CRP陽性率比較 17例患者WBC>10×109/L，占36.96%，46例患者CRP陽性，占95.83%。兩者比較差異有統計學意義（P 2.5 AECOPD患者血清N%陽性率與CRP陽性率比較 31例患者N%陽性，占67.39%，46例患者CRP陽性，占95.83%。兩者比較差異有統計學意義（P 3討論 慢阻肺是呼吸係統的常見病，目前COPD居人類死亡原因的第4位，根據WHO預測，到 2020 年，預計COPD 會居人類疾病經濟負擔的第5位。我國超過40 歲的人群 COPD患病率達 8.2%。COPD主要累及肺髒，同時也會導致肺外全身反應，而其全身表現是導致大部分患者致殘致死的主要原因。目前COPD 的發病機製還不十分明確，目前認為細胞毒性 T 細胞、中性粒細胞、巨噬細胞及參與了氣道壁和肺泡隔的慢性炎症，氣流阻塞進行性發展是 COPD 的主要特點[4-6]。細胞因子在氣道炎症中發揮重要的作用。約 2/3的COPD急性加重與感染有關。氣道、 肺實質以及肺血管發生慢性炎症是COPD的主要特征，在肺髒組織出現肺泡巨噬細胞、T 淋巴細胞以及中性粒細胞浸潤，而激活的炎性細胞釋放多種細胞因子，其中包括TNF-α、CRP以及其他遞質，從而出現 COPD典型的病理變化。 TNF-α主要是單核巨嗜細胞分泌的一種具有調節免疫與誘導炎症的細胞因子，屬於多肽類家族。本身定位於人染色體 6p21.3 區域，在Ⅲ類主要組織相容性抗原複合物體內。 TNF-α屬於一種蛋白質，由分子量為17×103亞單位構成，含 157 個氨基酸，基因約長 3.5 kb，mRNA長度 1.7 kb。人類 TNF的受體（TNFR）與不同蛋白質作用，激活不同的特異信號傳遞途徑。TNFR 1可以誘發直接細胞毒作用和內毒素休克作用，TNFR 2介導微生物感染的細胞免疫過程。TNF-α具有強烈的致炎作用，在機體對各種病原體感染的防禦過程中發揮作用[7，8]。其調節炎症反應的途徑主要有以下幾種：①在 TNF-α的作用下，上皮細胞表達表麵黏附分子（細胞間黏附分子 1、選擇蛋白等），黏附分子導致中性粒細胞、單核細胞黏附在上皮細胞上，繼而向血管外遷移；②TNF-α通過激活上皮細胞、巨噬細胞以及間質細胞，從而產生炎症細胞化學趨化因子等；③TNF-α誘導產生IL-6，從而促使急性期反應蛋白的產生，並激活上皮細胞、巨噬細胞以及中性粒細胞，導致更多炎性細胞趨化物的產生。被激活的巨噬細胞釋放中性粒細胞趨化因子趨化中性粒細胞，產生基質金屬蛋白酶降解肺實質中細胞外基質，包括膠原、彈性蛋白、蛋白多糖以及纖維結合素；被直接激活的中性粒細胞釋放彈性蛋白酶，激活核轉錄因子，增加TNF-α等細胞因子的釋放，使炎症反應擴大；上皮細胞既是靶細胞，也是參與炎症過程的效應細胞，具有促進中性粒細胞聚集和活化的作用。 TNF-α在慢阻肺氣道炎症的發生、發展過程中發揮重要的作用。TNF-α具有誘導炎症反應、增強細胞外彈性蛋白溶解、促進中性粒細胞黏附等作用[9，10]。慢阻肺吸煙患者氣道IL-8水平、中性粒細胞數目高於健康吸煙者，慢阻肺吸煙患者 TNF-α濃度升高較顯著，健康吸煙者TNF-α濃度變化不明顯。COPD 急性加重期氣道腔內IL-8 及TNF-α含量升高，而抗炎因子 IL-10 降低。TNF-α、IL-8、單核細胞趨化等參與了COPD 的發病。COPD 急性發作多由病毒或細菌感染所致，而細菌和病毒含有的某些抗原或代謝產物激活局部肺泡巨噬細胞，從而產生TNF-α等炎性因子，從而導致肺泡巨噬細胞以及支氣管上皮細胞產生 IL-8 等。進入血液的細胞因子和內毒素導致單核-巨噬細胞大量激活，從而導致血液中 TNF-α水平升高。研究顯