基於等溫滴定量熱法的注射用益氣複脈（凍幹）臨床聯合用藥相容性研究
製劑與炮製
作者：劉紅宇等
[摘要] 為了能快速、靈敏、較全麵反映中西藥注射劑臨床聯合用藥相互作用，該文采用等溫滴定量熱法（isothermal titration calorimetry，ITC），以注射用益氣複脈（凍幹）為模式藥，考察其分別與鹽酸腎上腺素和5%葡萄糖注射液的相容性，以熱力學參數吉布斯自由能 （ΔG）、焓變 （ΔH）、熵變 （ΔS） 判斷溶合反應類型，通過對比不同注射劑混合前後化學指紋圖譜特征信息對結果進行佐證。結果表明，注射用益氣複脈（凍幹）與鹽酸腎上腺素滴定過程中測得|ΔH|>T|ΔS|，為焓驅動反應，且釋放熱量較大，提示兩者之間的相互作用以化學反應為主，內在物質發生改變。注射用益氣複脈（凍幹）與5%葡萄糖溶液溶合時|ΔH|
[關鍵詞] 等溫滴定量熱法；注射用益氣複脈（凍幹）；鹽酸腎上腺素注射液；葡萄糖注射液；聯合用藥
[Abstract] To reveal the characterization of interaction between Chinese and western medicinal injections， isothermal titration calorimetry （ITC） was applied to evaluating the interaction of Yiqi Fumai injection （YQFM， as mode drug） with epinephrine hydrochloride injection （YS） and 5% glucose injection （5% GS）. The diversification of Gibbs free energy（ΔG）， enthalpy（ΔH）， and entropy （ΔS） were determined to judge the reaction types of colliquefaction procedures of different injections. Meanwhile， the fingerprints of YQFM before and after combined with the various injections were compared to validate the results. This work demonstrated that during the titration procedure of YQFM and YS， |ΔH| >T|ΔS|， that was to say the reaction was enthalpy-driving. And the reactive profile indicated that a great deal of heat gave out during the procedure. Obviously， chemical reactions happened and the internal component changed. On the other side， the reaction of YQFM combined with 5% GS was entropy-driving， because |ΔH|
[Key words] isothermal titration calorimetry （ITC）； Yiqi Fumai injection （YQFM）； hydrochloride injection （YS）； glucose injection （GS）； drug combination
伴隨著中藥注射劑臨床廣泛使用，有關其不良反應報道也日益增加。其中聯合用藥不當是重要原因之一，目前用於評價聯合用藥安全性的方法主要有肉眼觀察法、不溶性微粒檢測法[1-2]、pH測定法[3-4]、滲透壓檢測法[5]、HPLC[6-8]等。但這些方法難以反映藥物相互作用過程信息，因此亟待建立一種同時兼顧物理、化學特征變化的方法，在線靈敏快速測定藥物合用後理化特征的變化。
等溫滴定量熱法（isothermal titration calorimetry， ITC） [9-11]是通過微量量熱儀連續、準確地監測和記錄一個變化過程的量熱曲線，同時提供熱力學和動力學信息，並通過獲得的多個熱力學參數來判斷滴定反應的類型。目前主要應用於大分子和/或小分間的相互作用[12-13]，環境對反應的影響以及酶動力學等研究領域[14-17]。
注射用益氣複脈（凍幹）（Yiqi Fumai， YQFM）臨床上用於治療冠心病、勞累性心絞痛、氣陰兩虛[18-19]。鹽酸腎上腺素注射液（YS）有α和β受體激動作用，可引起冠狀血管擴張等。臨床上兩者經常配伍使用，治療氣陰兩虛型冠心病療效頗佳。但因成分複雜，聯合用藥缺乏充足有效的科學依據，時有不良反應事件發生。本研究以注射用益氣複脈（凍幹）為模式藥，根據其臨床常用聯合用藥分別選擇鹽酸腎上腺素注射液、5%葡萄糖注射液（GS）配伍，采用ITC法，通過測定2組藥物相互滴定過程中產生的反應活性譜圖以及熱力學參數，判斷反應類型；同時輔以化學指紋圖譜進行驗證，以客觀地揭示其相互作用表征的內在規律，為減少中藥注射劑臨床不良反應提供實驗支持。
1 材料
注射用益氣複脈（凍幹）（批號20131207，天津天士力之驕藥業有限公司）；鹽酸腎上腺素注射液（批號1404271，天津金耀藥業有限公司）；5%葡萄糖注射液（批號1405201701，石家莊四藥有限公司）。乙腈（色譜純，美國Fisher公司）；滅菌注射用水（批號1405546-B11，國藥集團容生製藥有限公司）。
NANO ITC2G 等溫滴定量熱儀（最低檢測限為0.1 nJ，基線穩定性為20 nW，25 ℃時溫度波動±0.000 2 ℃，工作溫度2～80 ℃，響應時間12 s，美國TA 公司）；Agilent 1200高效液相色譜儀（美國安捷倫科技有限公司）；BS210S型電子天平（北京Startorious有限公司）。
2 方法
2.1 ITC檢測
2.1.1 供試品溶液的製備 取注射用益氣複脈（凍幹）適量，加注射用滅菌水溶解，使其終質量濃度為0.054 g·L-1。