乙腈（色譜純，Merck 公司）；純淨水（娃哈哈）；甲醇（分析純，北京化工廠）。白當歸素（成都瑞芬思生物科技有限公司，批號RFS-B-100610-04，純度98%）；歐前胡素（成都普思生物科技有限公司，批號PS101228，純度98%）；異歐前胡素（中國食品藥品檢定研究院，批號110827-201109，純度98%）。
本課題組共收集到10個批次的白芷藥材，經過中國中醫科學院中藥研究所何希榮鑒定。
2 方法與結果
2.1 色譜條件
Agilent 1200 Platisil DOS C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；乙腈（A）-水（B）為流動相；流速1 mL·min-1；梯度洗脫（0～20 min，30% A；20～25 min，30% ～60% A；25～55 min，60% A）；柱溫30 ℃；檢測波長為254 nm；進樣量20 μL。
2.2 對照品溶液的製備
精密稱取白當歸素對照品5.69 mg，歐前胡素對照品9.31 mg，異歐前胡素對照品6.03 mg，分別置100 mL量瓶中，甲醇定容，取白當歸素、歐前胡素和異歐前胡素對照品溶液適量，置同一量瓶中，以甲醇定容至刻度，既得濃度白當歸素為5.69 mg·L-1，歐前胡素為33.03 mg·L-1和異歐前胡素為30.15 mg·L-1的混合對照品儲備液，備用。
2.3 供試品溶液的製備
取白芷藥材粉末（過3號篩），約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定質量，超聲處理40 min，放至室溫，再稱定質量，用甲醇補足失重，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液。
2.4 方法學考察
2.4.1 線性關係的考察 取2.2項下對照品儲備液，分別稀釋1，2，4，8，16，32，64倍。取各濃度的混合對照品溶液各20 μL，注入高效液相色譜儀，在2.1項色譜條件下，測定峰麵積。以各對照品峰麵積為縱坐標（Y），以對照品濃度為橫坐標（X），得標準曲線，結果表明各化合物在相應濃度範圍內線性關係良好。
2.4.2 精密度試驗 取同一份對照品溶液，在2.1項色譜條件下，連續進樣6次，記錄峰麵積，並計算峰麵積的RSD。結果顯示，白當歸素、歐前胡素和異歐前胡素峰麵積的RSD分別為0.87%，0.99%，0.86%。表明儀器的精密度良好。
2.4.3 重複性試驗 取同一批白芷藥材粉末約0.5 g，共6份，按2.3項下方法製備供試品溶液，精密吸取供試品溶液20 μL進樣，測定峰麵積，計算含量。結果顯示，6份樣品中，白當歸素、歐前胡素和異歐前胡素含量的RSD分別為3.4%，0.31%，0.29%。結果表明方法重複性良好。
2.4.4 穩定性試驗 取供試品溶液，室溫分別放置0，2，4，6，8，12 h後進樣，記錄峰麵積，計算峰麵積的RSD。結果顯示，白當歸素、歐前胡素和異歐前胡素峰麵積的RSD分別為3.4%，0.36%，0.42%，表明供試品溶液在12 h內穩定性良好。
2.4.5 加樣回收率試驗 取已知含量的同一批樣品約0.25 g，共6份，精密稱定，分別加入一定量對照品溶液。按2.3項下製備供試液，按2.1項下色譜條件進行測定，計算加樣回收率。結果顯示，白當歸素、歐前胡素和異歐前胡素的平均加樣回收率分別為100.83%，100.10%，103.52%，RSD分別為1.7%，0.77%，0.41%（n=6），表明方法的準確度良好。
2.5 10批次白芷藥材的含量測定結果
精密稱取10批白芷樣品，分別按2.3項下方法製備供試品溶液，按2.1項下色譜條件進行測定，計算各供試品中3個成分的含量。
3 討論
3.1 樣品處理方法的考察
課題組考察了不同濃度（50%，75%，100%）甲醇、乙醇，不同藥材-溶液比（1∶50，1∶100，1∶200），不同提取時間（30，40，50，60 min）對白芷中白當歸素、歐前胡素和異歐前胡素含量的提取影響。其中，0.5 g白芷，加入50 mL甲醇，超聲處理40 min時，白芷中白當歸素、歐前胡素和異歐前胡素的含量最高。因此，選擇0.5 g白芷，加入50 mL甲醇，超聲處理40 min作為白芷的樣品處理方法。
3.2 色譜條件的考察
課題組考察了樣品在甲醇-水、乙腈-水、甲醇-酸水和乙腈-酸水4種流動相係統條件下結合DAD檢測器全波長掃描液相圖，發現乙腈-水係統對樣品的分離度最好，峰型對稱，無拖尾現象，且白當歸素、歐前胡素和異歐前胡素在254 nm處均有較大吸收，因此選擇乙腈-水為流動相係統，254 nm為檢測波長。此外，作者所在課題組已經建立了白芷的化學指紋圖譜和2個成分（歐前胡素和異歐前胡素）的含量測定方法[10]，但是，為了保證白芷中所有成分有較好的分離度，采用的是梯度洗脫程序，然而造成基線漂移，且白當歸素未能得到有效分離。因此，為了更好的對白芷中關鍵藥效成分進行定量分析，本文章采用高效液相色譜法，在2個時間段分別采用等度洗脫。該方法縮短了歐前胡素和異歐前胡素出峰時間，提高了分析效率，且具有較好的穩定性、重複性。